澳洲胎牛血清提起血清融化,大家首先想到的方法就是4℃過夜法。
但由于血清融化過程中,蛋白比水先化,大量先化的蛋白和少量的水,靜靜地沉積在瓶子的底部,很容易導(dǎo)致一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。
澳洲胎牛血清使用:
在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動(dòng),使血清混勻,但不要產(chǎn)生泡沫!
澳洲胎牛血清不推薦熱滅活。
1,事實(shí)上,這種沉淀表明我們的血清是高質(zhì)量的,因?yàn)?ldquo;生鮮冷凍沉淀”依然保留著。
2,這種冷卻的生鮮沉淀僅在人類或者其它哺乳運(yùn)物的血清中和等離子當(dāng)中存在,是經(jīng)過迅速的無污染處理后,也對(duì)維護(hù)其蛋白或阻止污染的情況下,所謂的凝血因子VIII,凝血的血液或血清解凍時(shí),才會(huì)產(chǎn)生這樣的白色沉淀纖維(纖維蛋白原)。
3,很多中方人員習(xí)慣于使用經(jīng)過很多天反復(fù)凍融之后再處理,或者經(jīng)過濾心過濾的血清才會(huì)說是污染的,實(shí)際上經(jīng)過多次反復(fù)凍融處理的并經(jīng)濾心過濾的血清已經(jīng)失去了凝血因子VIII的作用了。
4,經(jīng)過多次反復(fù)冰融及濾心過濾的血清實(shí)際上已經(jīng)變得平庸了,變得失去了一些蛋白質(zhì),從而降低了促進(jìn)細(xì)胞生長的素質(zhì)或能力了。
5,當(dāng)解凍血清使用時(shí)如果不再出現(xiàn)沉淀的話,是一個(gè)壞的征兆。
血清的顏色受多種因素影響,不用批次的血清的顏色很有可能有較大差異。顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。血清的顏色與產(chǎn)品的品質(zhì)沒有直接的關(guān)系。
1、保存澳洲胎牛血清好的方法
血清應(yīng)該保存在-15℃至-25℃。因?yàn)槎鄶?shù)狀況下,一瓶500毫升的血清不能夠一次使用完畢,所以建議一次性將血清分裝成一次性能夠能夠試用完畢的體積(如50毫升)。若存放于4℃時(shí),不建議超過一個(gè)月。
2、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議血清在2-8℃的冰箱過夜融解。融解過程中規(guī)則地輕微地?fù)u晃能夠保證化凍的均勻,防止出現(xiàn)沉淀。
3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀物出現(xiàn),該如何處理?
血清中絮狀物的出現(xiàn)有許多種原因,常見的原因是血清中脂蛋白的變性;血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,也是造成絮狀物的主要原因之一。這些絮狀物的產(chǎn)生不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量。血清是否出現(xiàn)沉淀與血清的質(zhì)量沒有關(guān)系。沉淀物的形狀受多種因素影響,常見的是絮狀或晶體/片狀。
如果使用移液管能夠避開沉淀物,則無需進(jìn)行任何處理,使用移液管將血清加入培養(yǎng)基中。如果希望去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g離心力短暫離心,再將離心后的上清液加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。不建議使用過濾的方式去除絮狀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。
4、為什么儲(chǔ)存在冰箱中的澳洲胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?
澳洲胎牛血清沒有預(yù)老化,儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁物。這些沉淀的產(chǎn)生不會(huì)影響血清的質(zhì)量。
5、如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時(shí),請(qǐng)按照上述逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)。不建議直接將血清放在37℃水浴里解凍。溫度的變化過快會(huì)導(dǎo)致沉淀物和黑點(diǎn)的產(chǎn)生。
解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)輕輕地將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,影響血清的質(zhì)量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,無需做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃、30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。