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Jena bioscience--T4 DNA Ligase無縫DNA連接和生物技術應用工具

時間:2024/10/25閱讀:155
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T4 DNA連接酶催化在雙鏈DNARNA中相鄰的5'磷酸和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。

 

艾美捷T4 DNA Ligase

貨號:EN-149L

單位定義:一個Weiss單位被定義為在37°C20分鐘內催化1納摩爾的32P從焦磷酸鹽轉移到ATP,并轉化為Norit吸附不了的物質的酶的量。

適用于一般實驗室使用。

運輸:在凝膠包裝上運輸

儲存條件:在-20°C下儲存

附加儲存條件:避免凍融循環(huán)

保質期:12個月

形態(tài):液體(提供時含10 mM Tris-HCl pH 7.4,50 mM KCl,0.1 mM EDTA1 mM DTT,200 µg/ml BSA50% [v/v]甘油)

濃度:2.5 Weiss單位/微升(500 CE單位/微升)

 

T4 DNA Ligase內容:

標準連接緩沖液,10倍濃度。

25°C500 mM Tris-HCl pH 7.8100 mM MgCl2,100 mM DTT10 mM ATP25 µg/ml BSA

快速連接緩沖液,2倍濃度。

25°C60 mM Tris-HCl pH 7.820 mM MgCl2,20 mM DTT2 mM ATP10% PEG

11.png

連接緩沖液中的白色沉淀是正常的,不影響反應效率。不要加熱緩沖液,因為這會破壞其中的ATP

 

熱滅活:

T4 DNA連接酶可以通過在65°C下孵育10分鐘來滅活。

 

注意:

一個粘性末端連接單位(CEU)被定義為在16°C下,1x T4 DNA連接酶反應緩沖液中,30分鐘內,20微升總反應體積中,使λ DNAHind III片段(5' DNA末端濃度為0.12微摩爾,300微克/毫升)連接50%所需的酶量。

一個Weiss單位大約相當于200CE單位。

如果NaClKCl的濃度超過200 mMT4 DNA連接酶將受到強烈抑制。

連接平端和單堿基突出的片段需要大約50倍的酶量才能達到與粘性末端DNA片段相同的連接程度。通過添加PEG 4000(最終濃度為10% w/v)或六亞甲基氯化物,或將ATP濃度降低到50微摩爾,可以增強平端連接。

為了稀釋T4 DNA連接酶以便在-20°C下儲存,應使用含有50%甘油的儲存緩沖液;為了稀釋連接酶立即使用,建議使用1x反應緩沖液


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