瘦素，ob基因的產(chǎn)物（1,2），是一種分子量為16 kD的單鏈蛋白激素。它被認(rèn)為在體重調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它的氨基酸序列與其他蛋白質(zhì)沒有顯著的同源性（1）。瘦素幾乎只由分化的脂肪細(xì)胞產(chǎn)生。它作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，特別是下丘腦，抑制食物攝入并刺激能量消耗。瘦素受體——不同長度的替代剪接形式——屬于細(xì)胞因子類I受體家族。它們在全身廣泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用。存在一種循環(huán)形式的瘦素受體，它作為多種瘦素結(jié)合蛋白之一。除了其代謝效應(yīng)外，瘦素還被證明影響多個內(nèi)分泌軸。在雄性小鼠中，它減弱了饑餓引起的LH、睪酮、甲狀腺素的顯著下降，以及ACTH和p質(zhì)醇的增加。在雌性小鼠中，瘦素防止了饑餓引起的排卵延遲。由于ob基因突變而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育。這種缺陷可以通過瘦素的給藥來糾正，但通過禁食減肥則不能，這表明瘦素對生殖功能至關(guān)重要。所有這些作用至少部分可以通過瘦素對下丘腦弓狀核神經(jīng)元中神經(jīng)肽Y（NPY）表達(dá)和分泌的抑制作用來解釋。NPY是食欲的強烈刺激因子，已知它參與調(diào)節(jié)各種垂體激素，例如通過刺激生長y素抑制GH，抑制促x腺激素或刺激垂體-腎上腺軸。決定循環(huán)瘦素水平的最重要變量是體脂肪質(zhì)量。在規(guī)律飲食周期的條件下，瘦素反映了脂肪組織的比例，顯示出指數(shù)關(guān)系。這種構(gòu)成性的瘦素合成被許多非激素和激素變量調(diào)節(jié)。在嚙齒動物和人類中，過度進(jìn)食、高脂飲食、胰島素和糖皮質(zhì)激素是刺激因子。已經(jīng)顯示了禁食、cAMP和β-3-腎上腺素受體激動劑的抑制作用。從這些發(fā)現(xiàn)中可以清楚地看出，瘦素是各種代謝和內(nèi)分泌反饋循環(huán)的一個組成部分）。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種酶免疫測定試劑盒，適用于定量測定小鼠和大鼠血清或血漿中的瘦素，用于科學(xué)目的。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)檢測原理：

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種所謂的夾心法。它利用兩種不同的特異性高親和力多克隆抗體來治療這種蛋白質(zhì)。樣本中的瘦素與固定化抗體定量結(jié)合。在接下來的步驟中，生物s化抗體又與瘦素結(jié)合。洗滌后，加入鏈霉抗生物s蛋白-過氧化物酶偶聯(lián)物，其對生物s具有高度特異性，并與抗體的生物s結(jié)合。隨后，過氧化物酶催化酶反應(yīng)，導(dǎo)致藍(lán)色。藍(lán)色的強度取決于樣品的瘦素含量。通過加入終止溶液來終止反應(yīng)，并通過測量吸收來量化顏色強度。

技術(shù)說明

1 儲存條件

收到試劑盒后，在其有效期內(nèi)，將其存放在2-8°C。重組后的凍干試劑應(yīng)存放在-20°C。避免反復(fù)凍融。

2 儲存壽命

組分開封后的使用期限保證為4周。未使用的試紙條和微孔板應(yīng)與干燥劑一起密封存放在2-8°C的夾鎖袋中，并使用提供的框架。重組后的組分應(yīng)存放在-20°C（或更冷）。再次使用時，應(yīng)快速但輕柔地解凍（避免溫度升高超過室溫并避免過度渦旋）。只能冷凍一次！1:20稀釋的工作洗滌緩沖液WP在2-8°C下穩(wěn)定4周。

3 試劑準(zhǔn)備

使用前將所有試劑置于室溫（20 - 25°C）。緩沖液中的沉淀在使用前必須通過混合和/或加熱溶解。不能混合不同批次的試劑。

4 重組

標(biāo)準(zhǔn)品A – G和對照KS用稀釋緩沖液VP重組。建議將重組后的試劑在室溫下放置15分鐘，然后使用渦旋混合器c底但輕柔地（不應(yīng)產(chǎn)生泡沫）混合。只能冷凍一次！

5 稀釋

重組后，將對照KS與稀釋緩沖液VP按相同比例（1:5）稀釋，與樣本相同。所需體積的工作洗滌緩沖液WP是通過將20倍濃縮液與蒸餾水按1:20稀釋來準(zhǔn)備的。稀釋1:20的洗滌緩沖液WP穩(wěn)定4周。

6 測定程序

進(jìn)行測定時，空白、標(biāo)準(zhǔn)品A-G、對照KS和樣本應(yīng)盡可能快地（例如，<15分鐘）移液。為避免由于孵育時間差異導(dǎo)致的失真，抗體結(jié)合物AK、酶結(jié)合物EK以及隨后的底物溶液S應(yīng)與樣本以相同的順序和相同的時間間隔添加到板中。停止溶液SL應(yīng)與底物溶液以相同的順序添加到板中。所有測定（空白、標(biāo)準(zhǔn)品A-G、對照KS和樣本）應(yīng)進(jìn)行雙重測定。為獲得最佳結(jié)果，建議準(zhǔn)確移液并遵守操作規(guī)程。

7 孵育

室溫孵育意味著在20 – 25°C下孵育。底物溶液S，穩(wěn)定的四甲基聯(lián)苯胺，對光敏感；存放和孵育時應(yīng)避光。

8 搖動

孵育步驟應(yīng)在特別適合的微孔板振蕩器的平均旋轉(zhuǎn)頻率下進(jìn)行。建議將振蕩器設(shè)置為350轉(zhuǎn)/分鐘。由于振蕩器之間的技術(shù)差異，可能需要調(diào)整旋轉(zhuǎn)頻率。搖動不足可能導(dǎo)致溶液混合不充分和光學(xué)密度低、變異性高和/或假值；搖動過度可能導(dǎo)致光學(xué)密度高和/或假值。

9 洗滌

正確的洗滌對于測定的可靠和精確性能至關(guān)重要。不c底的洗滌會對測定結(jié)果產(chǎn)生不利影響。可能的后果是測量的光學(xué)密度出現(xiàn)不可控的、非特異性的變化，可能導(dǎo)致假結(jié)果。高背景值或高變異性等效應(yīng)可能表明洗滌問題。所有洗滌必須使用提供的稀釋至工作濃度的洗滌緩沖液進(jìn)行。每個洗滌周期和每個孔的洗滌體積至少為300 ?L。如果手動洗滌，可通過多步裝置、多通道移液器或噴瓶分配洗滌緩沖液。將板洗滌至生物危害垃圾桶，然后每個孔加入300?L洗滌緩沖液WP，倒出內(nèi)容物，并在吸收性組織上拍打。重復(fù)此步驟2次，共進(jìn)行3次洗滌。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

以下數(shù)據(jù)僅用于演示，不能代替分析時生成的數(shù)據(jù)。

圖1：具有多項式二次曲線擬合的示例性標(biāo)準(zhǔn)曲線。

文獻(xiàn)參考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59.

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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