瘦素，OB基因的產(chǎn)物（1,2），是一種單鏈蛋白激素，分子量為16kD，被認為在調(diào)節(jié)體重中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它的氨基酸序列與其他蛋白質(zhì)沒有明顯的同源性（1）。瘦素幾乎只由分化的脂肪細胞產(chǎn)生（3-5）。它作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，特別是下丘腦，從而抑制食物攝入和刺激能量消耗。瘦素受體存在不同的選擇性剪接形式，長度不同，屬于細胞因子類I受體家族。它們在全身廣泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用。存在一種循環(huán)形式的瘦素受體，它作為多種瘦素結(jié)合蛋白之一。除了其代謝效應(yīng)外，瘦素還被證明對許多內(nèi)分泌軸有強烈影響。在雄性小鼠中，它減弱了饑餓引起的LH、睪酮、甲狀腺素的顯著下降，以及ACTH和p質(zhì)醇的增加。在雌性小鼠中，瘦素防止了饑餓引起的排卵延遲。由于OB基因突變而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育。這種缺陷可以通過瘦素的給藥來糾正，但通過禁食減肥則不能，這表明瘦素對生殖功能至關(guān)重要。所有這些作用至少部分可以通過瘦素對下丘腦弓狀核神經(jīng)元中神經(jīng)肽Y（NPY）表達和分泌的抑制作用來解釋。NPY是食欲的強烈刺激因子，已知它參與調(diào)節(jié)各種垂體激素，例如通過刺激生長y素抑制GH，抑制促x腺激素或刺激垂體-腎上腺軸。決定循環(huán)瘦素水平的最重要變量是體脂肪質(zhì)量。在規(guī)律飲食周期的條件下，瘦素反映了脂肪組織的比例，顯示出指數(shù)關(guān)系。這種構(gòu)成性的瘦素合成被許多非激素和激素變量調(diào)節(jié)。在嚙齒動物和人類中，過度進食、胰島素和糖皮質(zhì)激素是刺激因子。已經(jīng)顯示了禁食、cAMP和β-3-腎上腺素受體激動劑的抑制作用。從這些發(fā)現(xiàn)中可以清楚地看出，瘦素是各種代謝和內(nèi)分泌反饋循環(huán)的一個組成部分。血清瘦素水平顯示出適度的晝夜變化，在夜間大約凌晨2點左右達到峰值。此時的瘦素值比早上或下午早些時候測量的水平高出約30到100%。這種變化，連同食物攝入的影響，需要在收集血液樣本時考慮。這種ELISA試劑盒適用于測定血清或血漿中的人瘦素，其他生物流體（例如唾液、尿液或母乳），以及用于研究目的的條件脂肪細胞培養(yǎng)基中的瘦素。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品瘦素超敏ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

瘦素超敏ELISA, 96孔檢測原理：

瘦素ELISA（超靈敏）是一種使用兩種特異性和高親和力抗體的夾心測定法。樣品中的瘦素與包被在微量滴定板上的第一抗體結(jié)合。在接下來的步驟中，第二特異性抗瘦素抗體依次與固定的瘦素結(jié)合。第二種抗體被生物s化，并與鏈霉抗生物s蛋白-過氧化物酶結(jié)合物結(jié)合。在封閉底物反應(yīng)中，顏色變化將根據(jù)樣品中的瘦素水平定量催化。

技術(shù)說明

必須嚴(yán)格按照測試協(xié)議進行測定。不能混合不同批號的試劑。使用前將所有試劑置于室溫（20 - 25°C）。使用前必須通過混合和/或加熱解決緩沖液中可能的沉淀問題。儲存和保質(zhì)期如果未開封并存放在2-8 °C并避免陽光直射，微孔板和試劑的穩(wěn)定性可保持至標(biāo)示的有效期。重組后的凍干試劑應(yīng)存放在-20°C。避免反復(fù)凍融。組分開封后的使用期限為4周。未使用的試紙條和微孔井應(yīng)與干燥劑一起密封存放在2-8 °C的密封袋中，并使用提供的框架。重組后的組分：校準(zhǔn)品A-E和對照CTR1及CTR2必須存放在-20°C（最多4周）。再次使用時，應(yīng)快速但輕柔地解凍（避免溫度升高超過室溫并避免過度渦旋）。最多3次凍融循環(huán)不影響測定。1X工作洗滌緩沖液WB在2-8°C下穩(wěn)定4周。重組校準(zhǔn)品A-E和對照CTR1及CTR2用稀釋緩沖液DIL重組。建議將重組試劑在室溫下放置15分鐘，然后使用渦旋混合器c底但輕柔地（不應(yīng)產(chǎn)生泡沫）混合。孵育在室溫下孵育意味著：在20 - 25°C下孵育。底物S，穩(wěn)定的四甲基聯(lián)苯胺，對光敏感——存放和孵育時應(yīng)避光。搖動孵育步驟應(yīng)在合適的微孔板振蕩器的平均旋轉(zhuǎn)頻率下進行。建議使用350轉(zhuǎn)/分鐘。由于振蕩器之間的差異，可能需要優(yōu)化旋轉(zhuǎn)頻率。搖動不足可能導(dǎo)致溶液混合不充分，從而導(dǎo)致光學(xué)密度低、變異性高和/或假值。搖動過度可能導(dǎo)致光學(xué)密度高和/或假值。稀釋通過將提供的20倍濃縮液與蒸餾水按1:20稀釋來準(zhǔn)備所需的1X工作洗滌緩沖液WB。重組后，將對照CTR1和CTR2與稀釋緩沖液DIL按相同比例（1:10）稀釋，與樣本相同。

典型校準(zhǔn)曲線示例：

圖1：具有多項式二次曲線擬合的示例性標(biāo)準(zhǔn)曲線。

文獻參考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning ofthe mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma proteinencoded by the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBSLett. 379:55-59. 

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438. 

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

作為ALPCO在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的ALPCO產(chǎn)品。

瘦素超敏ELISA, 96孔試劑盒瘦素超敏ELISA, 96孔試劑盒