除了不同的細(xì)胞培養(yǎng)模型和人體材料研究外，小鼠和大鼠是基礎(chǔ)研究和臨床前研究的理想模型系統(tǒng)。因此，這種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）被開發(fā)出來，作為在小鼠和大鼠中測(cè)量胰島素樣生長(zhǎng)因子I（IGF-I）的工具，用于研究和臨床前研究。然而，小鼠和人類中IGF-1的可比性是有限的，但以下是關(guān)于人類IGF-I系統(tǒng)的一些背景信息：胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）I和II在調(diào)節(jié)許多細(xì)胞類型的增殖和分化中起著關(guān)鍵作用（1-3）。IGF-I與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素C（Sm-C）相同（4），分子量為7649道爾頓（5）。其主要調(diào)節(jié)因素是生長(zhǎng)激素（GH）和營(yíng)養(yǎng)（6）。與許多其他肽類激素不同，IGFs與特定的結(jié)合蛋白（IGFBP）緊密結(jié)合。目前已知的七種IGFBP（7,8,22）要么與IGF-I和IGF-II結(jié)合的親和力相似，要么偏好IGF-II（9,10）。IGF-I測(cè)量的一個(gè)主要問題是由于IGFBPs在測(cè)定中的干擾。在未經(jīng)處理的血清樣本中直接測(cè)定（11）會(huì)給出錯(cuò)誤的值，因?yàn)樵跍y(cè)定孵化過程中IGF-I/IGFBP-3復(fù)合物的解離極其緩慢（見圖1）。IGF-1（小鼠/大鼠）ELISA用于測(cè)量小鼠和大鼠血清和血漿（肝素、EDTA或檸檬酸鹽）中的胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-I）。僅供研究使用。不用于診斷程序。

圖1:IGFBP對(duì)IGF-I測(cè)量的干擾。在0.5 ng（左）或5 ng（右）hIGFBP-3存在的情況下，通過常規(guī)和IGFBP阻斷試驗(yàn)測(cè)定已知濃度的IGF-I。

為了避免這些困難，開發(fā)了這種分析方法，其中沒有特殊的樣品制備測(cè)量前需要，但樣品在特殊條件下的酸化和稀釋除外設(shè)計(jì)緩沖系統(tǒng)。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品 Igf-1(小鼠，大鼠)elisa, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Igf-1(小鼠，大鼠)elisa, 96孔檢測(cè)原理：

超靈敏的人類生長(zhǎng)激素ELISA是一種夾心測(cè)定法。它利用了一種涂在微量滴定板孔上的特異性、高親和力的多克隆兔抗血清。樣品中的hGH與固定化抗血清定量相關(guān)。在接下來的步驟中，生物s化抗體與hGH結(jié)合。洗滌后，加入鏈霉抗生物s蛋白-過氧化物酶偶聯(lián)物，其與抗體的生物s高度特異性結(jié)合，并根據(jù)樣品的hGH水平催化底物定量變色。

圖2:IGFBP阻斷IGF-I ELISA的原理

技術(shù)說明

儲(chǔ)存條件

收到試劑盒后，在其有效期內(nèi)，將其存放在2-8°C。凍干試劑在重組后應(yīng)存放在-20°C。避免反復(fù)凍融。

儲(chǔ)存壽命

未使用的試紙條和微孔板應(yīng)與干燥劑一起密封存放在2-8°C的夾鎖袋中，并在提供的框架內(nèi)使用。重組后的組分，標(biāo)準(zhǔn)品A-E和對(duì)照血清KS1和KS2必須存放在-20°C（最多2個(gè)月）。

注意：標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)僅解凍一次。如有必要，應(yīng)分裝在適當(dāng)?shù)捏w積中。再次使用時(shí)，應(yīng)快速但輕柔地解凍（避免溫度升高超過室溫，避免過度渦旋）。

1:20稀釋的洗滌緩沖液WP在2-8°C下穩(wěn)定4周。

試劑準(zhǔn)備

使用前將所有試劑置于室溫（20 - 25°C）。緩沖液中的可能沉淀在使用前必須通過混合和/或加熱溶解。不能混合不同批號(hào)的試劑。

重組

標(biāo)準(zhǔn)品A-E和對(duì)照KS1和KS2用樣品緩沖液PP重組。建議將重組試劑在室溫下放置15分鐘，然后用渦旋混合器c底但輕柔地（不應(yīng)產(chǎn)生泡沫）混合。

稀釋

重組后，對(duì)照KS1和KS2用樣品緩沖液PP按與樣品相同的比例稀釋。

所需體積的洗滌緩沖液WP是通過將提供的20倍濃縮液與蒸餾水按1:20稀釋來準(zhǔn)備的。

測(cè)定程序

進(jìn)行測(cè)定時(shí)，空白、標(biāo)準(zhǔn)品A-E、對(duì)照KS1和KS2及樣本應(yīng)盡可能快地（例如<15分鐘）移液。為避免由于孵育時(shí)間差異導(dǎo)致的測(cè)定結(jié)果變化，抗體結(jié)合物AK和酶結(jié)合物EK以及隨后的底物溶液S應(yīng)與樣本以相同的順序和相同的時(shí)間間隔添加到板中。停止溶液SL應(yīng)與底物溶液S以相同的順序添加到板中。所有測(cè)定（空白、標(biāo)準(zhǔn)品A-E、對(duì)照KS1和KS2及樣本）應(yīng)進(jìn)行雙重測(cè)定。為獲得最佳結(jié)果，建議準(zhǔn)確移液并遵守操作規(guī)程。

文獻(xiàn)參考：

1. Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2. Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messengerribonucleic acid and gene structures, serum, and tissue concentrations. Rev. 10:68-91

3. Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York:Elsevier

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng)。

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