豬CRP ELISA試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫測定法（ELISA）用于測定豬血清和血漿樣本中的CRP。僅供研究使用。不是用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品豬C-反應(yīng)蛋白ELISA。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

豬C-反應(yīng)蛋白ELISA檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測定中，樣品中的C反應(yīng)蛋白（CRP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP抗體發(fā)生反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗CRP抗體。這些酶標記的抗體與之前結(jié)合的CRP形成復(fù)合物。經(jīng)過再次洗滌后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測試樣品中CRP的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中CRP濃度的量度。測試樣品中CRP的量可以從標準曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進行校正。

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險。處理和處置時遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、嚴重溶血、脂血或樣品完整性受到質(zhì)疑，請記錄并謹慎解釋結(jié)果。以下列出的樣品收集和儲存條件僅供參考。樣品穩(wěn)定性尚未評估。

? 血清樣品 - 應(yīng)通過靜脈穿刺收集血液。血凝后通過離心分離血清。取出血清立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

? 血漿樣品 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

? 已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應(yīng)。EDTA可能會影響CRP的結(jié)合，因此不建議用作抗凝劑。

樣品稀釋

測定要求每個樣品在使用前進行稀釋。每次進行測定時，所有樣品都應(yīng)以雙份進行測定。推薦的稀釋比例僅供參考。

稀釋比例應(yīng)基于未知樣品的預(yù)期濃度，以便稀釋后的樣品落在標準曲線的動態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣品水平，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣品進行系列稀釋。

? 血清和血漿樣品 - 推薦的起始稀釋比例是1:2000。要制備1:2000的樣品稀釋液，將5 ?L的樣品轉(zhuǎn)移到495 ?L的1X稀釋液中。這會產(chǎn)生1:100的稀釋比例。接下來，將1:100的稀釋液通過將20 ?L轉(zhuǎn)移到380 ?L的1X稀釋液中進行稀釋。這會產(chǎn)生1:2000的稀釋比例。每個階段都要C底混合。

試劑準備

? 稀釋液 - 按提供的狀態(tài)使用。

? 洗滌液濃縮物 - 提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，19份dH2O）按1:20稀釋。濃縮物在低溫儲存時可能會形成晶體。稀釋前將濃縮物加熱至30 - 35°C可以溶解晶體。

? 酶-抗體結(jié)合物 - 通過向每個微孔板測試條使用的1X稀釋液中添加10 ?L酶-抗體結(jié)合物和990 ?L來計算每個微孔板測試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋，并避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免產(chǎn)生泡沫。

? 預(yù)包被ELISA微孔板 - 按提供的狀態(tài)使用。打開鋁箔袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，同時放回干燥劑。

? 豬C反應(yīng)蛋白校準物 - 根據(jù)批次特定的分析證書進行準備。

結(jié)果計算

1. 從每個孔的測試值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對每個標準的平均重復(fù)讀數(shù)進行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標準曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數(shù)據(jù)來構(gòu)建標準曲線。也可以使用二次多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數(shù)據(jù)的擬合精度會較低。

3. 從標準曲線中插值得到樣品值。校正稀釋因子，以得出原始樣品中的CRP濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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