小鼠C-反應蛋白ELISA CRP ELISA是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫測定法，用于測定小鼠血清和血漿中C-反應蛋白（CRP）的水平。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品小鼠C-反應蛋白ELISA。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

小鼠C-反應蛋白ELISA檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測定中，樣品中的C反應蛋白（CRP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP抗體發(fā)生反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗CRP抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的CRP形成復合物。經(jīng)過再次洗滌后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結合的酶標記抗體。結合的酶標記抗體的量與測試樣品中CRP的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中CRP濃度的量度。測試樣品中CRP的量可以從標準曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進行校正。

需要的材料但未提供

? 精密移液器（2 ?L至1000 ?L），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 微孔板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器

? 制備試劑和緩沖溶液所需的各種玻璃器皿

? 計時器

? 離心機

? 抗凝劑（用于血漿樣品收集）

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。

處理和處置時遵循通用預防措施。

如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、嚴重溶血、脂血或樣品完整性受到質疑，請記錄并謹慎解釋結果。

以下列出的樣品收集和儲存條件僅供參考。

樣品穩(wěn)定性尚未評估。

? 血清樣品 - 應通過靜脈穿刺收集血液。血凝后通過離心分離血清。取出血清立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

? 血漿樣品 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

? 已知干擾物質 - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

樣品稀釋

測定要求每個測試樣品在使用前進行稀釋。每次進行測定時，所有樣品都應以雙份進行測定。推薦的稀釋比例僅供參考。

稀釋比例應基于未知樣品的預期濃度，以便稀釋后的樣品落在標準曲線的動態(tài)范圍內。如果不確定樣品水平，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣品進行系列稀釋。

? 血漿和血清樣品 - 推薦的起始稀釋比例是1:200。要制備1:200的樣品稀釋液，將5 ?L的樣品轉移到995 ?L的1X稀釋液中。c底混合。

結果計算

1. 從每個孔的測試值中減去平均背景值。

2. 對每個標準的平均重復讀數(shù)進行平均，并使用結果構建標準曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數(shù)據(jù)來構建標準曲線。也可以使用二次多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數(shù)據(jù)的擬合精度會較低。

3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣品中的CRP濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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