C-反應(yīng)蛋白（馬）ELISA是一種高度敏感的雙位點(diǎn)酶聯(lián)馬血清中C-反應(yīng)蛋白的ELISA定量測(cè)定以及血漿。僅供研究使用。不用于診斷程序。

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c反應(yīng)蛋白(馬)ELISA, 96孔檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測(cè)定中，樣品中的C反應(yīng)蛋白（CRP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗CRP蛋白抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的CRP形成復(fù)合物。經(jīng)過再次洗滌后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測(cè)定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中CRP的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中CRP蛋白濃度的量度。測(cè)試樣品中CRP的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

需要的材料但未提供

? 精密移液器（2 ?L至1000 ?L），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 噴霧瓶或微孔板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器

? 制備試劑和緩沖溶液所需的各種玻璃器皿

? 計(jì)時(shí)器

? 離心機(jī)

? 抗凝劑（用于血漿樣品收集）

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。

處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。

如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、嚴(yán)重溶血、脂血或樣品完整性受到質(zhì)疑，請(qǐng)記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。

樣品穩(wěn)定性尚未評(píng)估。

? 血清樣品：應(yīng)通過靜脈穿刺收集血液。血凝后通過離心分離血清。取出血清立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

? 血漿樣品：應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

? 已知干擾物質(zhì)：濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣品稀釋

測(cè)定要求每個(gè)測(cè)試樣品在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，所有樣品都應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。推薦的稀釋比例僅供參考。

稀釋比例應(yīng)基于未知樣品的預(yù)期濃度，以便稀釋后的樣品落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣品值，強(qiáng)烈建議在運(yùn)行整個(gè)板之前，先用一個(gè)或兩個(gè)代表性樣品進(jìn)行系列稀釋。

? 血清和血漿樣品：推薦的起始稀釋比例是1:100。要制備1:100的樣品稀釋液，將5 ?L的樣品轉(zhuǎn)移到495 ?L的1X稀釋液中。這會(huì)產(chǎn)生1:100的稀釋比例。c底混合。

結(jié)果計(jì)算

1. 從所有孔的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均重復(fù)讀數(shù)進(jìn)行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-PL）曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來減少數(shù)據(jù)來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二次多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合精度會(huì)較低。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到測(cè)試樣品值。校正稀釋因子，以得出原始樣品中的CRP蛋白濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng)。

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