觸珠蛋白檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于豬血清和血漿中觸珠蛋白的測(cè)定。僅供研究使用。不是為了用于診斷程序。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品豬結(jié)合珠蛋白ELISA。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

小鼠觸珠蛋白ELISA檢測(cè)原理：

如圖1所示，在這種測(cè)定中，樣品中的觸珠蛋白與已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗觸珠蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗觸珠蛋白抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的觸珠蛋白形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中觸珠蛋白的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中觸珠蛋白濃度的量度。測(cè)試樣品中觸珠蛋白的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

所需材料但未提供

精密移液器（2微升至1000微升），用于制備和分配稀釋液

試管

微孔板洗滌器/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀取器

用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計(jì)時(shí)器

離心機(jī)

抗凝劑（血漿樣品）

樣品收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、明顯溶血、脂血，或樣品的完整性存在問(wèn)題，請(qǐng)做好記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。下列樣品收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。未評(píng)估樣品的穩(wěn)定性。

血清樣品 - 應(yīng)通過(guò)靜脈采血。血凝塊形成后，通過(guò)離心分離血清。移除血清并立即進(jìn)行測(cè)定，或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

血漿樣品 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣品稀釋

測(cè)定要求每個(gè)測(cè)試樣品在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，所有樣品都應(yīng)進(jìn)行雙重測(cè)定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋比例應(yīng)基于未知樣品的預(yù)期濃度，以使稀釋后的樣品落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣品水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣品進(jìn)行系列稀釋。

血清和血漿樣品 - 建議的起始稀釋比例為1:10,000。要制備1:10,000的樣品稀釋液，將5微升的樣品轉(zhuǎn)移到495微升的1X稀釋液中。這會(huì)產(chǎn)生1:100的稀釋液。接下來(lái)，將1:100的稀釋液再稀釋，將5微升轉(zhuǎn)移到495微升的1X稀釋液中。這會(huì)產(chǎn)生1:10,000的稀釋液。每個(gè)階段都要c底混合。

試劑準(zhǔn)備

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份去離子水）稀釋1:5。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份去離子水）稀釋1:20。濃縮液在儲(chǔ)存溫度較低時(shí)可能會(huì)形成晶體。稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶抗體結(jié)合物 - 通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條添加10微升酶抗體結(jié)合物至990微升1X稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

預(yù)包被ELISA微孔板 - 按提供狀態(tài)直接使用。揭開鋁箔袋，從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，同時(shí)放入干燥劑。

豬觸珠蛋白校準(zhǔn)液 - 根據(jù)批次特定的分析證明進(jìn)行準(zhǔn)備。

結(jié)果計(jì)算

從每個(gè)孔的值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均重復(fù)讀數(shù)進(jìn)行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)減少數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合將不夠精確。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值樣品值。校正稀釋因子，以得到原始樣品中觸珠蛋白的濃度。

附錄A - 參考血清信息

此試劑盒中包含一瓶參考血清。請(qǐng)參閱隨附的產(chǎn)品概況表以獲取批次特定信息。請(qǐng)注意以下事項(xiàng)：

收到參考血清后應(yīng)立即冷凍。如果儲(chǔ)存得當(dāng)，直到過(guò)期日期前都是穩(wěn)定的。

參考血清應(yīng)適當(dāng)稀釋，以適應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍。請(qǐng)參閱協(xié)議中的“樣品稀釋"部分以獲取說(shuō)明。

在移液樣品（程序部分）時(shí)，也應(yīng)雙重移液參考血清。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

作為ALPCO在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的ALPCO產(chǎn)品。

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