全人IgA ELISA試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫測定（ELISA）用于測定人血清或血漿中的IgA。僅供研究使用。不適用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品IgA(人)ELISA試劑盒，96w。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgA(人)ELISA試劑盒，96w檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測定中，樣本中的IgA與吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgA抗體發(fā)生反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗IgA抗體。這些酶標記的抗體與之前結(jié)合的IgA形成復合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定結(jié)合的酶。結(jié)合酶的量與測試樣本中IgA的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中IgA濃度的量度。測試樣本中IgA的量可以從標準曲線中插值得到，并根據(jù)樣本稀釋進行校正。

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險物。處理和處置時應(yīng)遵循通用預防措施。如果血液樣本出現(xiàn)凝塊、嚴重溶血、脂血或樣本完整性存疑，請做好記錄并謹慎解釋結(jié)果。以下列出的樣本收集和儲存條件僅供參考。樣本穩(wěn)定性未經(jīng)評估。

血清樣本 - 應(yīng)通過靜脈穿刺收集血液。血液凝固后通過離心分離血清。取出血清后立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

血漿樣本 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

已知干擾物質(zhì) - 疊氮化物和硫柳汞在高于0.1%的濃度時會抑制酶反應(yīng)。

樣本稀釋

測定要求每個樣本在使用前進行稀釋。每次進行測定時，所有樣本應(yīng)進行雙重測定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋應(yīng)基于未知樣本的預期濃度，以使稀釋后的樣本落在標準曲線的動態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，強烈建議在運行整個板之前，先用一個或兩個代表性樣本進行系列稀釋測定。

血清和血漿樣本 - 建議起始稀釋比例為1:10,000。要制備1:10,000的y本稀釋液，將5微升樣本轉(zhuǎn)移到495微升1X稀釋液中。接下來，將1:100的樣本通過將5微升轉(zhuǎn)移到495微升1X稀釋液中進行稀釋。這得到1:10,000的y本稀釋液。每個階段都要c底混合。

試劑準備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1:5。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1:20。濃縮液在儲存溫度低時可能會形成晶體。稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結(jié)合物 - 通過向每個微孔板測試條添加10微升酶-抗體結(jié)合物到990微升1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結(jié)合物溶液量。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

預涂覆ELISA微孔板 - 按提供狀態(tài)使用。打開箔袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑一起。

人類IgA校準液 - 根據(jù)批次特定的分析證明書進行準備。

結(jié)果計算

從每個孔的值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數(shù)）。

平均每個標準品的雙重讀數(shù)，并使用結(jié)果構(gòu)建標準曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數(shù)據(jù)，構(gòu)建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數(shù)據(jù)的擬合精度會較低。

從標準曲線中插值樣本值。校正稀釋因子，得出原始樣本中的IgA濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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