Hypoxyprobe?-1綠色套件組件的詳細(xì)描述

1) Hypoxyprobe?-1是一種替代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱為皮莫尼達(dá)唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米處有紫外吸收（在0.9%的鹽水中消光系數(shù)為7020）。其游離堿基，皮莫尼達(dá)唑，分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇水分配系數(shù)為8.5。

固體Hypoxyprobe?-1在室溫下柔和光線中儲(chǔ)存兩年，在4攝氏度的0.9%鹽水（100克/升）中儲(chǔ)存4.5年，未檢測(cè)到降解（紫外和HPLC分析）。

皮莫尼達(dá)唑在缺氧細(xì)胞中被還原激活，并與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）基團(tuán)形成穩(wěn)定的加合物。FITC-MAb1與這些加合物結(jié)合，允許通過免疫化學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。

2) FITC-MAb1是一種熒光素結(jié)合的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆11.23.22.R），在含有0.09%普羅林作為穩(wěn)定劑的PBS中以0.5毫克/毫升的濃度供應(yīng)。感興趣的組織可以通過免疫組織化學(xué)在冷凍固定切片或福爾馬林固定的石蠟包埋切片上進(jìn)行研究，或者在組織解離后通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行研究。

注意：FITC-MAb1與皮莫尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在免疫組織化學(xué)處理過程中，肽和氨基酸加合物會(huì)被沖洗掉，因此免疫組織化學(xué)的缺氧檢測(cè)依賴于缺氧組織中皮莫尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)加合物。

作為Hypoxyprobe在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Hypoxyprobe熱銷產(chǎn)品Hypoxyprobe綠色套件。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Hypoxyprobe綠色套件：

應(yīng)用：用于細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測(cè)，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶或流式細(xì)胞術(shù)。該試劑盒在福爾馬林固定的石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供強(qiáng)烈的免疫染色和非常低的背景。

數(shù)量：a. Hypoxyprobe?-1綠色試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的皮莫尼達(dá)唑鹽酸鹽。通常動(dòng)物研究中使用的劑量為每公斤體重60毫克。

b. 一個(gè)瓶（100毫克和200毫克試劑盒）或兩個(gè)瓶（1000毫克試劑盒）含有200微升稀釋的FITC結(jié)合的IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每個(gè)瓶含有200微升的0.50毫克/毫升的FITC-MAb1溶液，溶于含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊D化鈉的PBS中。FITC-MAb1的最佳稀釋度應(yīng)由研究者確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度與1:50-100稀釋度的過氧化物酶結(jié)合的抗FITC二抗結(jié)合使用時(shí)，在大鼠腫瘤組織中能給出強(qiáng)烈的免疫染色。雖然FITC-MAb1不是專門設(shè)計(jì)用于免疫熒光，但可以用于此目的。通常免疫熒光的抗體稀釋度比免疫過氧化物酶檢測(cè)的要低。

不提供：用于免疫組化分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

儲(chǔ)存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下避光處（也可以存放在2-8攝氏度）。

b. 將FITC-MAb存放在2-8攝氏度的黑暗中。不要冷凍。

檢測(cè)說明

1. 對(duì)正常或腫瘤組織缺氧的調(diào)查始于通過靜脈輸注、腹腔注射或口服給予Hypoxyprobe?-1（皮莫尼達(dá)唑鹽酸鹽）溶液，劑量為每公斤體重60毫克。對(duì)于一只25克的大鼠，這相當(dāng)于每只大鼠1.5毫克。在小鼠中使用了高達(dá)400毫克/公斤的劑量，未檢測(cè)到毒性或組織缺氧的變化，但60毫克/公斤在低成本下能獲得良好的免疫染色。

Hypoxyprobe?-1在鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe?-1。注射或攝取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有組織，包括大腦，但它只與那些氧氣濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中的含硫蛋白質(zhì)形成加合物——相當(dāng)于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。

除了腫瘤，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚也擁有pO2 = 10毫米汞柱的細(xì)胞或低于此值的細(xì)胞。這些正常組織會(huì)結(jié)合Hypoxyprobe?-1。

小鼠體內(nèi)Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在給予Hypoxyprobe?-1后15至90分鐘內(nèi)采集。在采集時(shí)組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織解離時(shí)被結(jié)合，但與組織在15至90分鐘實(shí)驗(yàn)期間暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結(jié)合是不可檢測(cè)的。

除了動(dòng)物研究，Hypoxyprobe?套件也可用于組織培養(yǎng)中的細(xì)胞。通常，細(xì)胞懸浮液在缺氧條件下與100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小時(shí)。通過細(xì)胞涂片、固定和用FITC-MAb1免疫染色來收集細(xì)胞。

圖：福爾馬林固定石蠟中缺氧探針結(jié)合的免疫過氧化物酶染色使用1:100稀釋的FITC-MAb1從嚙齒動(dòng)物腫瘤中包埋組織切片1:100稀釋的辣根過氧化物酶偶聯(lián)兔抗FITC IgG。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標(biāo)志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細(xì)胞因子，所有產(chǎn)品皆基于Pimonidazole核心結(jié)構(gòu)來開發(fā)。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標(biāo)記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標(biāo)記不同（可應(yīng)用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細(xì)胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

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