逆轉錄病毒基因轉移是一種高效地將穩(wěn)定、可遺傳的遺傳物質引入任何分裂細胞類型基因組的技術?；谀迥嵝∈蟀籽〔《荆∕MLV）的載體，對于大多數有絲分裂細胞類型，轉導效率可達到超過90%，并且通過改變感染復數可以輕松控制每個細胞的拷貝數。

當前的逆轉錄病毒基因轉移技術基于包裝細胞系和逆轉錄病毒表達載體的協(xié)調設計。包裝細胞系通常包含病毒的gag、pol和env基因，這些基因對于病毒顆粒的形成和復制是必需的，并且它們被穩(wěn)定整合到包裝細胞的基因組中。逆轉錄病毒表達載體提供包裝信號ψ+、轉錄和處理元件以及目標基因。插入片段長達6.5 kb可以被高效包裝。將逆轉錄病毒載體轉染到包裝細胞系中可以產生高滴度、復制缺陷型病毒。

由包裝細胞系表達的病毒env基因編碼包膜蛋白，該蛋白決定了包裝病毒的感染范圍（嗜性）。病毒包膜根據用于進入宿主細胞的受體進行分類（見表1）。嗜性病毒只能識別小鼠和大鼠細胞上的一種受體。兩性病毒可以識別廣泛哺乳動物細胞類型上的一種受體。泛嗜性病毒，例如用囊泡性口炎病毒（VSV-G）包膜糖蛋白假型化的逆轉錄病毒，可以感染哺乳動物和非哺乳動物細胞。與其他病毒包膜蛋白不同，VSV-G通過脂質結合和質膜融合介導病毒進入。然而，VSV-G包膜蛋白的穩(wěn)定表達是有毒的，因此泛嗜性病毒通常是通過瞬時共轉染逆轉錄病毒表達載體和pVSV-G到僅表達病毒gag和pol基因的泛嗜性包裝細胞系中產生的。

傳統(tǒng)的基于NIH-3T3的逆轉錄病毒包裝細胞系和Phoenix包裝細胞系由于包裝細胞中逆轉錄病毒結構蛋白（gag、pol、env）的表達水平較低，導致病毒產量低且穩(wěn)定性有限?；?93T細胞系的Platinum包裝細胞系是一種高效的逆轉錄病毒包裝細胞系，通過使用帶有EF1α啟動子的新型包裝構建體生成，以確保更長的穩(wěn)定性和高產量的逆轉錄病毒結構蛋白表達（gag、pol、env）。在藥物選擇的條件下，Platinum細胞可以保持良好的狀態(tài)至少4個月，并且通過瞬時轉染可以產生平均滴度為1×10?感染單位/mL的逆轉錄病毒。此外，由于僅使用病毒結構基因的編碼序列，避免了任何不必要的逆轉錄病毒序列，因此幾乎不存在復制型逆轉錄病毒（RCR）。

Cell Biolabs的嗜性Platinum逆轉錄病毒表達系統(tǒng)提供了一種簡單的方法，用于高效生成無RCR的嗜性逆轉錄病毒。該試劑盒包括Plat-E包裝細胞、pMXs-Puro、pMXs-Neo逆轉錄病毒表達載體和pMXs-GFP對照載體。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cell Biolabs熱銷產品鉑逆轉錄病毒表達系統(tǒng)，包裝細胞系。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

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1. RV-200：ViraDuctin?逆轉錄病毒轉導試劑盒  

2. VPK-120：QuickTiter?逆轉錄病毒定量試劑盒  

3. VPK-301：Platinum逆轉錄病毒表達系統(tǒng)（兩性）  

4. VPK-302：Platinum逆轉錄病毒表達系統(tǒng)（泛嗜性）  

試劑盒組成（干冰運輸）

1. Plat-E逆轉錄病毒包裝細胞系（部件編號RV-101）：一支無菌管——1.0 mL，細胞濃度>3×10?個/mL，含20%胎牛血清和10% DMSO的DMEM培養(yǎng)基。  

2. pMXs-Puro（部件編號RTV-012）：一支無菌管——10 ?g的pMXs-Puro質粒，濃度為0.25 ?g/?L，溶于TE緩沖液。  

3. pMXs-Neo（部件編號RTV-011）：一支無菌管——10 ?g的pMXs-Neo質粒，濃度為0.25 ?g/?L，溶于TE緩沖液。  

4. pMXs-GFP（部件編號RTV-050）：一支無菌管——10 ?g的pMXs-GFP質粒，濃度為0.25 ?g/?L，溶于TE緩沖液。  

未提供材料

1. Plat-E培養(yǎng)基：DMEM，10%胎牛血清（FBS），1 ?g/mL嘌呤霉素，10 ?g/mL殺稻瘟菌素，青霉素和鏈霉素。  

2. Platinum細胞凍存培養(yǎng)基：70% DMEM，20% FBS，10% DMSO。  

3. 轉染試劑。  

4. 質粒提取試劑盒。  

保存方法

將Platinum逆轉錄病毒包裝細胞系保存在液氮中，質粒保存在-20℃。

**注意**：為獲得最佳結果，請在收到細胞后立即開始培養(yǎng)。如果無法立即進行，可將細胞保存在-80℃，直到開始培養(yǎng)。后續(xù)培養(yǎng)的細胞應長期保存在液氮中。

pMXs-Puro和pMXs-Neo

Cell Biolabs的pMXs逆轉錄病毒載體基于莫洛尼小鼠白血病病毒（MMLV）。該載體提供病毒包裝信號、轉錄和處理元件以及用于目標基因克隆的多克隆位點（MCS）。載體包含氨芐青霉素抗性基因，用于細菌中的擴增和抗生素選擇（見圖1）。

圖1. pMXs-Puro和pMXs-Neo逆轉錄病毒載體的示意圖。

文獻參考：

1. Miller, A. D. & Baltimore, C. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:2895–2902.

2. Mann, R., Mulligan, R. C. and Baltimore, D. (1983) Cell 33:153–159.

3. Morita, S., Kojim, T., and Kitamura, T. (2000) Gene Therapy 7: 1063-1066.

4. Takahashi, K. and Yamanaka, S. (2006) Cell 126: 663-676

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業(yè)城市圣迭戈（San Diego），是有名的細胞學試劑品牌，作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產商，為生物技術和研究類客戶提供好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的g端產品和技術服務。產品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業(yè)的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產品。  

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