組蛋白的甲基化和去甲基化分別由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去甲基化酶動態(tài)調(diào)控。H3K27二甲基化水平在沉默基因中高于活性基因，表明這種組蛋白修飾與轉(zhuǎn)錄抑制相關(guān)。

以兔為宿主制備的針對組蛋白H3在賴氨酸27位點二甲基化（H3K27me2）的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K27me2多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me2多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達系統(tǒng)：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/68 ?l

免疫原：合成肽

儲存/穩(wěn)定性：在-80°C下可保存長達2年。分裝以避免反復(fù)凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗結(jié)果

使用針對H3K27me2的抗體（產(chǎn)品編號25241）和優(yōu)化的qPCR引物組合，在人HeLa細胞中進行ChIP實驗。實驗使用了100萬細胞的剪切染色質(zhì)?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實驗，并進行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因GAPDH和EIF4A2的啟動子引物作為陰性對照，以及非活性基因HBB的啟動子和非活性基因MYOD1的編碼區(qū)引物作為陽性對照。

抗體滴度測定

為了測定抗體滴度，使用針對H3K27me2的抗體（產(chǎn)品編號25241）進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖，估計抗體的滴度為1:480,000。

交叉反應(yīng)性測試

使用針對H3K27me2的抗體（產(chǎn)品編號25241）進行點雜交分析，測試其與其他修飾的組蛋白H3和H4肽段以及未修飾序列的交叉反應(yīng)性。將含有相應(yīng)組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點在膜上，抗體稀釋度為1:50,000。圖3顯示抗體對目標修飾具有高特異性。

Western Blot分析

使用針對H3K27me2的抗體（產(chǎn)品編號25241），對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析。抗體在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側(cè)標記了目標蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標記（單位：kDa）。

免疫熒光分析

HeLa細胞用針對H3K27me2的抗體（產(chǎn)品編號25241）和DAPI進行染色。細胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進行封閉。細胞用H3K27me2抗體（左側(cè)）在封閉液中稀釋1:500進行免疫熒光標記，隨后用與Alexa488偶聯(lián)的抗兔抗體進行二抗標記。中間圖顯示了DAPI對細胞核的染色。右側(cè)圖顯示了兩種染色的合并圖像。

應(yīng)用

ChIP（2 ?g/ChIP）

ELISA（1:1000）

點雜交（1:50,000）

Western Blot（1:1000）

免疫熒光（1:500）

運輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應(yīng)性：人

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應(yīng)由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。

注意事項：避免反復(fù)凍融。

科學(xué)分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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