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斑點金免疫滲濾測定（DIGFA）實驗
閱讀：715 發(fā)布時間：2019-5-10實驗方法原理
斑點金免疫滲濾測定實驗是在斑點免疫滲濾測定法基礎上，改用膠體金標記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應。全過程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽性結(jié)果在膜上呈紅色斑點。
實驗材料 細胞樣品
試劑、試劑盒 PBS吐溫-20BSA特異性抗體 抗原金標抗體
儀器、耗材 滲濾裝置NC膜
實驗步驟
一、試劑及材料
1. 滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6 cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個直徑0.5 cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2 ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥，保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。
2. 封閉液：含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。
3. 洗滌液：50 mol/L，pH7.2 PBS。
4. 特異性抗體(一抗)或抗原
5. 金標抗體
二、操作方法
1. 取出滲濾器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（約100 ml）封閉液；
2. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加待檢標本1滴（約50 ml）；
3. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100 ml）洗滌液；
4. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加金標抗體1滴（約50 ml），使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應；
5. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100 ml）洗滌液；
6. 至洗滌液*滲入盒內(nèi)
三、結(jié)果觀察
在小孔NC膜上出現(xiàn)紅色反應時為陽性反應，陰性反應不著色。
收起
注意事項
1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定適用量。