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一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于經(jīng)過固定和洗滌的細胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細胞。
細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。
注：FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫，實際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。
一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)有如下優(yōu)點
(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色明亮，可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細胞凋亡。
(2)特異性：TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞，而不容易標記壞死細胞。
(3)快速：僅需約1-2個小時即可完成。
(4)方便：只需一步染色反應，洗滌后即可觀察，不必使用二抗等進行多步操作。
(5)應用范圍廣：可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。(6) 實測效果好：參考圖1，本試劑盒的實際檢測效果和國外同類產品相當。
圖1. 一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)的檢測效果以及和Roche公司同類產品檢測效果的比較。A. 本試劑盒和Roche公司同類試劑盒分別檢測正常HeLa細胞和經(jīng)DNase I處理的HeLa細胞的效果圖，圖中的綠色熒光為TUNEL染色陽性細胞。B. 本試劑盒和Roche公司同類試劑盒分別檢測正常HeLa細胞和經(jīng)10μM喜樹堿(Camptothecin)處理24小時的HeLa細胞的效果圖。無論是經(jīng)DNase I處理的陽性細胞樣品，還是使用10μM喜樹堿處理的陽性細胞樣品，本試劑盒和Roche公司的同類試劑盒的效果相當。本圖中的染色實驗均在12孔板中進行。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測條件，實際獲得的結果可能有較明顯的差別。
TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。
極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下，同時檢測多個凋亡指標。
本試劑盒足夠檢測20個樣品。
包裝清單：
產品編號 產品名稱 包裝
C1086-1 TdT酶 100μl
C1086-2 熒光標記液 900μl
C1086-3 TdT酶稀釋液(選用) 500μl
— 說明書 1份
保存條件：
-20℃保存，熒光標記液需避光保存。
注意事項：
需自備用于洗滌細胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)，用于固定的4%多聚甲醛或向訂購免疫染色固定液(P0098)，同時需自備含0.3% Triton X-100的PBS或向訂購免疫染色強力通透液(P0097)。
如果用于石蠟切片的檢測，需自備蛋白酶K，二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向訂購。
一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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