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Dicer酶1(DICER1)重組蛋白

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更新時間:2023-04-10 16:26:53瀏覽次數(shù):326

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 說明書
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 用于科研
英文名稱 Recombinant Dicer 1, Ribonuclease Type III (D 物種 Homo sapiens (Human,人)
來源 原核表達 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
Dicer酶1(DICER1)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品:RSV-F重組人類呼吸道合胞病毒 hRSV (A2) Fusion glycoprotein / RSV-F 蛋白 (His 標簽) Protein
Tn-C(Tenascin-C 0.5mgTn-C(Tenascin-C)C-Terminus 腱糖蛋白-C(固生蛋白)C端抗原
RAC1重組人 RAC1 / MIG5 蛋白 (GST 標簽) Pro

詳細介紹

標簽選擇:

親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHOHEK293

b.      表達載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達小試,條件優(yōu)化

f.       表達分析和鑒定(SDS-PGAEWB

g.      大量表達

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

僅供科研實驗產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

物種

性狀

來源

Dicer1(DICER1)重組蛋白

Homo sapiens (Human,人)

凍干粉

原核表達

英文名稱:Recombinant Dicer 1, Ribonuclease Type III (DICER1)

Dicer; HERNA; Dicer 1,Double-Stranded RNA-Specific Endoribonuclease; Helicase with RNase motif; Helicase MOI

酶與激酶

物種:Homo sapiens (Human,人)

來源:原核表達

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位::細胞質(zhì)

預(yù)測分子量:35.8kDa

實際分子量:33kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽:Leu6~Ser290 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% TrehaloseProclin300

性狀:凍干粉

純度:> 90%

等電點:5.2

應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

相關(guān)產(chǎn)品:

Tn-C(Tenascin-C 0.5mgTn-C(Tenascin-C)C-Terminus 腱糖蛋白-C(固生蛋白)C端抗原

AMBP Protein Human 重組人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 蛋白 (Fc 標簽)

RSV-F重組人類呼吸道合胞病毒 hRSV (A2) Fusion glycoprotein / RSV-F 蛋白 (His 標簽) Protein

VEGFC Protein Human 重組人 VEGF-C 蛋白 (His 標簽)

RAC1重組人 R

1.png

原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達菌株

e.      蛋白表達小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測

  誘導(dǎo)表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng),按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

操作步驟 :

根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

鼻血吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Schistosoma nasalePCR 50T

倍贊氏金蠅PCR檢測試劑盒 英文名稱; Chrysomya bezzianaPCR 50T

鮑氏不動桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Acinetobacter baumanniiPCR 50T

阪崎腸桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Enterobacter sakazakiPCR 50T

mouse Caspase-9 小鼠Caspase-9Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-Phospho-FLT3 (Tyr842) 0酸化FMS樣酪3Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml

PABA(Human para-aminobenzoic acid) ELISA Kit 人對基苯 96T

SP-C Propeptide 英文名稱: 肺表面活性蛋白C前體肽抗體 0.1ml

CECR5 英文名稱: 貓眼綜合征染色體候選基因5抗體 0.2ml

Anti-Phospho-FLT3 (Tyr842) 0酸化FMS樣酪3Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Dicer1(DICER1)重組蛋白莢膜組織胞漿菌馬皮疽變種PCR檢測試劑盒 英文名稱; Histoplasma capsulatum var. farciminosumPCR

莢膜組織胞漿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Histoplasma capsulatumPCR

加州立克次體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ajellomyces capsulate PCR

加利福利亞腦炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; California Encephalitis VirusRTPCR

注意事項:  

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復(fù),然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作


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