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免疫學(xué)工具WB與ELISA各方面比較
閱讀:86 發(fā)布時(shí)間:2024-4-8免疫學(xué)檢測(cè)是應(yīng)用免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的一系列測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)手段,用途非常廣泛,既可用于基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究,因此免疫學(xué)研究一直都是生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)W術(shù)前沿。
免疫印跡WB(Western Blot)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),是免疫學(xué)常用工具,應(yīng)用于目的蛋白的定位、定性和定量。
WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)ELISA做不到。
ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)你可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響。
WB是目前一種結(jié)合內(nèi)參對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量的方法,Elisa可以定量檢測(cè)某些蛋白、激素等。
一、目的
雖然兩者都是通過(guò)抗原抗體反應(yīng)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),WB主要還是定性,Elisa可以定性,也可以定量。
WB所檢測(cè)的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測(cè)。
WB所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的;而Elisa無(wú)能為力,一鍋端了。
二、模式
WB是(抗原-抗體-二抗酶)模式進(jìn)行檢測(cè);Elisa模式有多種,如(抗原-抗體-二抗酶)、(抗原-抗體-抗原酶)、(抗抗體-抗體-抗原酶)、(抗體-抗原-抗體酶)、(抗抗體-抗體-抗原-抗體酶)等等很多很多。
三、抗體的適用性
WB所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的,ELISA線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講,WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定,而Elisa不行。
四、靈敏度
一般Elisa的靈敏度要遠(yuǎn)高于WB,這從一般酶標(biāo)記物的使用濃度或待檢樣品的稀釋度上就可以看出。
五、可操作性
WB一次處理量就是一塊膠版,10-20個(gè)樣品zui多了。Elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本,可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照、梯度樣等來(lái)提高檢測(cè)的可信度。
WB操作常見(jiàn)的非特異性條帶,膜本底差,顯色不好等等缺點(diǎn)在Elisa上表現(xiàn)得要好得多。
六、商品化度
WB不管怎樣,都要自己先做電泳。而Elisa有很多成熟的商品化試劑盒了,只要不怕花錢,檢測(cè)要方便快捷得多。