培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
英文名稱:Saracatinib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg Saracatinib是一種有效的Src抑制劑,IC50為2.7nM,也抑制EGFRL861Q(IC50=4nM),EGFRL858R(IC50=5nM)和v-Abl(IC50=30nM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):379231-04-6 別名:AZD0530 純度:99.88% 分子量:542.03 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
鏈格孢菌叉頭蛋白O3A抗體Human AGPS (Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal) ELISA KIT綿羊白蛋白(Albumin)免疫試劑盒
尖鱗黃傘卵泡相關(guān)蛋白1Human AIF1L (Allograft inflammatory factor 1-like) ELISA KIT綿羊γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒
(疣孢漆斑菌)成纖維生長(zhǎng)因子受體5抗體Human AMER1 (APC membrane recruitment protein 1) ELISA KIT綿羊C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒
硬結(jié)桿菌磷化粘著斑激抗體Human ADSSL1 (Adenylosuccinate synthetase isozyme 1) ELISA KIT綿羊5羥色/血清/血清(5HT/ST)免疫試劑盒
擬盤(pán)多毛孢屬磷化粘著斑激抗體Human AMBN (Ameloblastin) ELISA KIT綿羊5羥二十碳四烯(5-HETE)免疫試劑盒
干草鞘單胞菌口蹄疫病A型抗體Human ADRB2 (Beta-2 adrenergic receptor) ELISA KIT綿羊3-硝基酪(3-NT)免疫試劑盒
植物乳桿菌FBXO28蛋白抗體Human AAGAB (Alpha- and gamma-adaptin-binding protein p34) ELISA KIT綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒
釀酒酵母FBXW5蛋白抗體Human ALMS1 (Alstrom syndrome protein 1) ELISA KIT綿羊17羥孕(17-OHP)免疫試劑盒
土地芽孢桿菌FBXW12蛋白抗體Human ADRA1D (Alpha-1D adrenergic receptor) ELISA KIT貓ELISA試劑盒
根瘤菌FBXO42蛋白抗體Human AMDHD1 (Probable imidazolonepropionase) ELISA KIT貓腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
貝酵母FasL抗體Human ADIG (Adipogenin) ELISA KIT貓?jiān)屑?孕(PROG)免疫試劑盒
肇慶曲霉原纖維蛋白1抗體Human ARFGEF1 (Brefeldin A-inhibited guanine nucleotide-exchange protein 1) ELISA KIT貓游離狀腺原(Free-T3)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌胰腺衍生因子抗體Human FDX1L (Adrenodoxin-like protein, mitochondrial) ELISA KIT貓游離甲狀腺(FT4)免疫試劑盒
煙曲霉性成纖維生長(zhǎng)因子抗體Human ADPRH ([Protein ADP-ribosylarginine] hydrolase) ELISA KIT貓血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒
硬結(jié)節(jié)桿菌凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體Human RRM2(Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2) ELISA Kit貓?zhí)剪?(CA9)免疫試劑盒
假結(jié)合棒桿菌凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體Human ABR (Active breakpoint cluster region-related protein) ELISA KIT貓嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)免疫試劑盒
青銅小單孢菌Micromonospora│chalcea 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.0%(GC)補(bǔ)骨脂二氫黃
泡波曲霉屬Emericella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)補(bǔ)骨脂定
小菌核菌Sclerotium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品表兒茶
Src抑制劑(Saracatinib)硫魚(yú)精蛋白
其他精蛋白硫鹽;魚(yú)精蛋白硫鹽
英文名稱:Protamine sulfate
其他英文名稱:Salmine sulfate
產(chǎn)品規(guī)格:BR,100u/mg
包裝:1克/5克/25克
CAS號(hào):53597-25-4
分子量:5000~10000
級(jí)別:BR
效價(jià):按干品計(jì),每1mg硫魚(yú)精蛋白所中和的肝抗凝血作用不得少于100單位,其效價(jià)應(yīng)為標(biāo)示量的90~110%
氮含量:21~25%
干燥失重:≤7%
鑒別:合格
性狀:粉末。鮭魚(yú)提取,溶于熱水、水、稀,難溶于水、乙,不溶于
用途:生化研究。為低分子量具有強(qiáng)堿性的蛋白質(zhì),帶強(qiáng)陽(yáng)電荷。能通過(guò)離子鍵與強(qiáng)性的肝結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物,從而使肝失去抗凝活性(肝為粘多糖的硫脂,呈強(qiáng)性帶陰電荷,其抗凝作用與所帶陰電荷有關(guān))。
保存:2~8℃