培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase-1活性測定試劑盒 | Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細胞caspase-1活性。測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應(yīng)于Caspase-1的水解活性。 |
細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發(fā)育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產(chǎn)生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產(chǎn)生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調(diào)節(jié)細胞凋亡,并通過對細胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)細胞因子介導的免疫炎性反應(yīng)。
運輸及保存:試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內(nèi)穩(wěn)定。
所需儀器:酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。
工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定,但靈敏度略降。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
蝶呤(標準品)英文名稱: Fluoxetine Hydrochloride8號染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
蝶呤二鈉鹽 (標準品)英文名稱: Fluvoxamine maleateCD73抗體包裝25g
磺丁脲(標準品)英文名稱: Fluvoxamine maleate軸突相關(guān)粘附分子抗體包裝500g
咪唑英文名稱: Formestane6型膠原蛋白α5抗體包裝1g
咪唑(標準品)英文名稱: Formestane神經(jīng)粘附分子CALL抗體包裝5g
芬那(標準品)英文名稱: Fosinopril sodium中性粒殺菌蛋白BP30抗體包裝100ml
砜霉(標準品)英文名稱: Furosemide21號染色體開放閱讀框56抗體包裝500ml
鈷(標準品)英文名稱: FurosemideT淋巴CD1抗體包裝50ml
磺地平(標準品)英文名稱: Gemfibrozil角蛋白5抗體包裝100g
磺倍他司汀(標準品)英文名稱: Gemfibrozil補體C9a抗體包裝25g
磺達沙星(標準品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框141抗體包裝1g
磺多拉司瓊(標準品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框160抗體包裝5g
磺多沙唑(標準品)英文名稱: Glyburide/Gliebenclamide親環(huán)蛋白(親環(huán))40抗體包裝100g
磺酚妥拉明(標準品)英文名稱: Glyburide/GliebenclamideT調(diào)控相關(guān)蛋白抗體包裝25g
磺吉米沙星(標準品)英文名稱: Glimepiride突觸后蛋白CRIPT抗體包裝5g
白靈側(cè)耳(白靈菇)Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品相撲結(jié)合UBC9試劑盒無檸檬;Citric acid
季也蒙畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質(zhì)量規(guī)格:干品純度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運蛋白試劑盒文多靈;Vindoline
pTargetFpTargetF 質(zhì)量規(guī)格:含量測定腺苷脫試劑盒五味子;Schisandrin
Caspase-1活性測定試劑盒鹽環(huán)胞苷
其他鹽環(huán)胞啶;鹽環(huán)胞甙;安西他濱鹽鹽
英文名稱:Cyclo-C
其他英文名稱:Cyclocytidine HC1;Ancitabine hydrochloride;2,2'-Anhydro-1-beta-D-arabinofuranosylcytosine hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:高純,98%
包 裝: 5克
CAS號:10212-25-6
C9H11N3O4•HCl=261.66
級別:High purity grade
含量:≥98.0%
氯化物:≤0.01%
硫鹽:≤0.01%
重金屬:≤10ppm
性狀:微黃色至黃褐色粉末,微溶于水,水溶液呈性,具旋光性,在260nm處有大吸收峰;主要由四種核糖核苷通過3′,5′-磷二酯鍵連接成單鏈大分子,單鏈大分子通過自身回折使堿基配對可形成雙螺旋結(jié)構(gòu),分子量大于104,主要有三種即核糖體核糖核(rRNA)信使核糖核(mRNA)和轉(zhuǎn)移核糖核(tRNA)。一種重要的生物大分子。易為強堿所降解,主要產(chǎn)生四種A、C、G、U 3′(2′)-核苷
用途:生化研究。核糖核的底物,也用于食品調(diào)味劑、核類及生化研究。與蛋白質(zhì)生物合成有關(guān),對DNA中遺傳信息的表達十分重要。RNA在DNA復(fù)制中還起引物作用,對于DNA所含遺傳信息的傳遞也是的
保存:2~8℃