人胰腺腫瘤成纖維細胞永生化公司正在出售的產(chǎn)品：人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat，CloneE6-1 (STR鑒定正確)小鼠肺癌細胞紅色熒光LLC+RFP（種屬鑒定）人骨肉瘤細胞帶熒光143B+LUC(STR鑒定正確)小鼠海馬神經(jīng)元細胞 HT22（種屬鑒定）小鼠肺泡上皮細胞 MLE-12（種屬鑒定）小鼠腎小球系膜細胞SV40-MES-13 （種屬鑒定）非洲綠猴腎細胞CV-1（種屬鑒定）

一、細胞基本屬性

細胞詳述

癌組織由實質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細胞構(gòu)成癌實質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實質(zhì)的作用，不具有特異性。

當實體瘤超過1-2mm時，需要通過新生的血管和活化的癌相關成纖維細胞來獲取癌細胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關成纖維細胞可通過分泌多種細胞因子和生長因子來發(fā)揮促進癌血管生成的作用。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也能觀察到相似的EMT過程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直接決定腫瘤的發(fā)生發(fā)展。多種因素可影響該界面，其中癌相關成纖維細胞是數(shù)量豐富的基質(zhì)細胞，在調(diào)節(jié)腫瘤細胞EMT過程中發(fā)揮重要作用。它通過細胞與細胞間相互接觸及分泌各種細胞因子、蛋白酶類等，促進上皮細胞及其細胞惡性轉(zhuǎn)化，并對界面各組分產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細胞。

細胞特性

1） 細胞來源于人手術胰腺癌組織。

2） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

3） 細胞生長方式：長梭形，貼壁培養(yǎng)。

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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