詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
DAPI solution,1mg/ml | 1ml | 1~3天 |
商品介紹:
本產(chǎn)品為DAPI水溶液,濃度為1mg/ml。使用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)不同直接將本產(chǎn)品用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度。 |
CAS號:28718-90-3
分子式:C16H15N5·2HCl
分子量:350.25
儲存條件:?20℃避光保存,有效期至少2年
純度:≥90% (HPLC和 TLC)
DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)是一種能夠與DNA中大部分A,T堿基相互結(jié)合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀測。因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜﹐它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時(shí),最大吸收波長為358nm,最大發(fā)射波長為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色,且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長僅有少部分重疊,可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/span>
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
α-胞襯蛋白(SPTAN1)elisa試劑盒英文名稱:SPTAN1 ELISA Kit鈣連蛋白抗體包裝500g
α白蛋白(AFM)elisa試劑盒英文名稱:AFM ELISA Kit二氫嘧啶相關(guān)蛋白2抗體包裝50mg
α2-纖溶抑制因子(α2PI)elisa試劑盒英文名稱:α2PI ELISA Kit色P450ⅡE1抗體包裝1g
α2-巨球蛋白(α2M)elisa試劑盒英文名稱:α2M ELISA Kit趨化因子受體1抗體包裝100g
α2-HS糖蛋白(αHSG)elisa試劑盒英文名稱:αHSG ELISA Kit磷化原癌基因c-Raf抗體包裝25g
α1-微球蛋白(α1M)elisa試劑盒英文名稱:α1M ELISA Kit磷化致癌基因C-Myc抗體包裝500g
α1-性糖蛋白(α1AGP)elisa試劑盒英文名稱:α1AGP ELISA KitCD33抗體包裝1g
α1-抗(α1AT)elisa試劑盒英文名稱:α1AT ELISA Kit磷化原癌基因c-kit抗體包裝5g
Zeste同源物增強(qiáng)子1(EZH1)elisa試劑盒英文名稱:EZH1 ELISA Kit磷化原癌基因c-Jun抗體包裝1g
YY肽(PYY)elisa試劑盒英文名稱:PYY ELISA Kit離子通道蛋白3抗體包裝25g
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)elisa試劑盒英文名稱:XRCC6 ELISA Kit磷化周期E抗體包裝5g
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白5(XRCC5)elisa試劑盒英文名稱:XRCC5 ELISA Kit磷化分裂周期蛋白25C抗體包裝250mg
X-框結(jié)合蛋白1(XBP1)elisa試劑盒英文名稱:XBP1 ELISA Kit磷化周期依賴性激9抗體包裝1g
Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)elisa試劑盒英文名稱:WFS1 ELISA Kit磷化Connexin 43蛋白抗體包裝5g
WNT1誘導(dǎo)信號通道蛋白1(WISP1)elisa試劑盒英文名稱:WISP1 ELISA Kit絲切蛋白抗體包裝100g
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度98%以上異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G試劑盒乙酰纈草三酯;Acevaltratum
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E試劑盒乙酰哈巴苷;8-O-Acetylharp
: =CGMCC1.5361=JCM14000資源名稱: 黃微球菌 質(zhì)量規(guī)格:含量測定異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D試劑盒異型南五味子丁;Heterocliti
DAPI溶液(1mg/ml)抑制劑
其他胰抑制劑
英文名稱:STI
其他英文名稱:STBI;Trypsin inhibitor(soybean)
產(chǎn)品規(guī)格:BR,4000BAEEu/mg,大豆
包裝:100毫克 /500毫克
CAS號:9035-81-8
級別:BR
分子量:~22000
活力:≥4000BAEE u/mg
活力定義:1mg抑制劑抑制4000BAEE u所需的量
含量:~80%
活力:≥6000 units/mg
活力定義:1 U corresponds to 1 biological kallikrein inhibitor unit (KIU)
干燥失重:≤6.0%
Working range:0.1~0.3μM
級別:BR
活力:≥100 units/mg
性狀:米干燥粉末,易溶于水、生理鹽水,不溶于乙、酮
用途:生化研究??梢种?、纖溶和組織及血漿中的激肽釋放等和抑制許多絲蛋白。
保存:2~8℃,保質(zhì)期2年
活力:30u/mg
說明:pH8.0.Ribonuclease<0.0002% by weight as Rnase A using a poly C assay.Phosphodiesterase not detectable when assay at 0.1mg/ml with bis(p-nitrophenyl)phosphate.
級別:Conjugation grade
來源:小牛腸
性狀:懸浮液,Ammonium sulfate suspension。溶于水和稀釋緩沖液。堿性磷能催化除去DNA、RNA、三磷核糖核苷和三磷脫氧核糖核苷的5′磷基團(tuán)。由于CIP處理后的DNA段缺少連接所要求的5′磷末端,因此它們不能進(jìn)行自連接(1)。這個(gè)特性可以在克隆時(shí)降低載體DNA的背景
用途:生化研究。切除DNA, RNA, rNTPs及dNTPs的5′末端磷基團(tuán);防止克隆載體的自環(huán)化連接;蛋白質(zhì)絲、蘇、酪殘基的去磷化
保存:-20℃