CCK-8試劑盒正在出售的產(chǎn)品：兔子α2抗纖溶黃芩Human
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大鼠高鐵血紅蛋白黃藤Human, Mouse
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弓形蟲抗體 IgG(間接法二步法)黃楊(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Rat
弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法)黃鐘花醌;拉帕 (標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
弓形蟲抗體 IgM(捕獲法

中文名稱：CCK-8試劑盒

英文名稱：Cell counting KIT-8

產(chǎn)品規(guī)格：100T|500T|500T*10

發(fā)貨周期：1～3天

使用說明：

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測定細胞具體數(shù)量時)

1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。

2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸)，OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。)

二、細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37℃,5% CO2的條件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù))。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

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大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3試劑盒α-亞麻;alpha-Linoleni

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CCK-8試劑盒（豬胰）

英文名稱：Trypsin(porcine pancreas)

產(chǎn)品規(guī)格：BR，1：250

包裝：100克/500克/25克

產(chǎn)品規(guī)格：組織培養(yǎng)級，1：300

包裝：50克/250克

CAS號：9002-07-7

分子量：23300

級別：BR

效價：1：250

活力：≥250U/mg

干燥失重：≤5.0%

級別：Tissue culture grade

性狀：類淡黃色粉末。適溫度35～37℃。反應(yīng)：甘油三酯+H2O＝甘油二酯+脂肪陰離子。對一級酯基團易水解。甘油單酯是差的底物。有兩個差不多相同的同工脂肪： A與B。等電點(pI)A為4.9、 B為5.0。吸光系數(shù)(E1%280)13.3。激活劑為鈣(CA2+)。

用途：生化研究。定量分析血清中甘油三酯。前列腺脂的分析。脂肪分析。用于水解酯鍵1，3位，分解脂肪成甘油和脂肪

保存：2～8℃

操作規(guī)程：

1、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)