組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例) 1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。 2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。 3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。 4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 | 二、樣品DNA的制備 8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取, 多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照), 一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。 可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。 9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒。 | 三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行) 10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。 11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加) |
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
Human Beta catenin, Beta-Cat ELISA Kit 人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白Multi-class antibodies: 48T
SRF/SAP2/MCM1 生長(zhǎng)釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子)Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat human IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgM 0.1ml
Hsp-40(Mouse Heat Shock Protein 40) ELISA Kit 小鼠熱休克蛋白40 96T
NCOA3 類(lèi)固醇受體激活蛋白3抗體 0.2ml
Biglycan 骨/軟骨蛋白多糖1抗體 0.2ml
SRF/SAP2/MCM1 生長(zhǎng)釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子)Multi-class antibodies: 0.2ml
MKK6(Human mitogen activated protein kinase kinase 6) ELISA Kit 人原活化蛋白激激6Multi-class antibodies: 48T
mucin3/Muc3 粘蛋白-3抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ING1/p33 生長(zhǎng)抑制因子基因1抗體 0.1ml
SCFR ELISA Kit 大鼠干細(xì)胞因子受體 96T
PSD95 突觸后密度蛋白95抗體 0.1ml
C19orf25 19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框25抗體 0.1ml
mucin3/Muc3 粘蛋白-3抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit MG IgG/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml
GPR142 G蛋白偶聯(lián)受體GPR142蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh APS APS抗體 0.1ml
IKK alpha/FITC 熒光標(biāo)記核因子κB激alpha抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Mink IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗貂IgG 0.1ml
Rb/RB1 protein/FITC 熒光標(biāo)記視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
非洲豬瘟病毒PCR試劑盒50次產(chǎn)阿拉伯糖醇漢遜酵母種屬: Hansenula│arabitolgenes提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 13生長(zhǎng)條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
百日咳博德特氏菌種屬: Bordetella│pertussis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 菌苗 1,2,3 微生物學(xué)報(bào) 5(4)411 1957培養(yǎng)基: CM0119生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)種屬: Escherichiacoli安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2
鄉(xiāng)間布丘氏菌種屬: Buttiauxella│agrestis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法
緊密連接蛋白1(ZO1)ELISA試劑盒碳鋇 CP,98%并噻吩-2- 98%/羧芐西林鈉
金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1(ADAMTS1)ELISA試劑盒碳鋇 99.95% metals basis4-叔丁基 97%羧芐西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)
金屬硫蛋白2(MT-2)ELISA試劑盒碳鋇 99.8%,D50 0.5-1.5μm4-芐氧基 97%芬達(dá)唑;硫咪唑
金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒碳鍶 電子級(jí),0.3~0.5um,99.5%4-溴 97%芬達(dá)唑;硫咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)
金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒氫氧化鍶 99.5%3,5-雙(三氟甲基) 97%前列鈉(D型)
金葡菌腸(SE)ELISA試劑盒氧化鎘 AR,99%3-芐氧基-2,6-二氟 97%前列鈉(DL型)
解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)ELISA試劑盒氧化鎘 CP,98.5%2-丁氧基 97%鹽川芎(標(biāo)準(zhǔn)品)
解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)ELISA試劑盒氧化鎘 99.99% metals basis4-溴-2-(三氟甲基)甲 97%鹽川芎
解整合樣金屬蛋白33(ADAM33)ELISA試劑盒鎘 AR,99.0%4-溴-2-三氟酚 99%頭孢氨芐
解整合樣金屬蛋白19(ADAM19)ELISA試劑盒鎘 SP4-芐氧基-3- 98%頭孢氨芐(標(biāo)準(zhǔn)品)
解整合樣金屬蛋白15(ADAM15)ELISA試劑盒鎘 99.98%,powder,粒徑:10±5μm5-基-2-氟 97%赤霉GA3
解整合樣金屬蛋白12(ADAM12)ELISA試劑盒鎘 99.99%,granular4-羧基 97%霉
解整合樣金屬蛋白10(ADAM10)ELISA試劑盒質(zhì)鎘標(biāo)樣 0.1mg/l,分析標(biāo)準(zhǔn)品 2--4-氟 98%霉(標(biāo)準(zhǔn)品)
解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA試劑盒鎘 AR,powder,粒徑:10±5μm2-羧基 97%霉(植物培養(yǎng)級(jí))
睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒鎘 99.999%,granular2--4-茴香 95%阿魏鈉
結(jié)核菌(Tuberculin)ELISA試劑盒2-氨基-6-甲基吡啶 98%5--2-氟 97%阿魏鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。