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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：錦鯉皰疹病毒（KHV）PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-02R6462
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品分類：水產(chǎn)養(yǎng)殖病害檢測(cè)系列（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
MYL1/MYL2 /FITC 熒光標(biāo)記肌球蛋白輕鏈1/2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TRIM32/FITC 熒光標(biāo)記TRIM32抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABCD1/CCL22 嗜粒細(xì)胞趨化蛋白22抗體 0.1ml
Mouse Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml
GDF8 生長(zhǎng)分化因子8抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rab25 癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab25抗體 0.2ml
TRIM32/FITC 熒光標(biāo)記TRIM32抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Human Secretin ELISA Kit 人促胰液/胰泌Multi-class antibodies： 48T
TRT/TERT 端?？贵wMulti-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh MARCH11 膜相關(guān)環(huán)指蛋白11抗體 0.2ml
SGK2(Human serum/glucocorticoid regulated kinase 2) ELISA KIT 人血清/糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激2 96T
RNF122 環(huán)指蛋白122抗體 0.2ml
Phospho-Beta Catenin (Thr41 + Ser45) 磷化β 連環(huán)蛋白抗體 0.1ml
TRT/TERT 端粒抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit chicken IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
GAS8 生長(zhǎng)停滯特異性蛋白8抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADAM20 去整合樣金屬蛋白20抗體 0.2ml
Phospho-MARCKS (Ser162) /FITC 熒光標(biāo)記磷化丙蛋白激C底物Marcks抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Bovine IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗IgM 0.1ml
TFR/CD71/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
錦鯉皰疹病毒（KHV）PCR檢測(cè)試劑盒通用型亮（leucine）含量比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠血管緊張Ⅱelisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞亮（leucine）含量比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠抑瘤Melisa檢測(cè)試劑盒
組織亮（leucine）含量比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠膀胱腫瘤抗原elisa檢測(cè)試劑盒
血液亮（leucine）含量比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠Ⅰ型膠原N末端肽elisa檢測(cè)試劑盒
體液亮（leucine）含量比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠膠原Ielisa檢測(cè)試劑盒
植物亮（leucine）含量比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠孤腓肽elisa檢測(cè)試劑盒
通用型亮（leucine）含量高效液相色譜法檢測(cè)試劑盒20次大鼠性磷elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞亮（leucine）含量高效液相色譜法檢測(cè)試劑盒20次大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2elisa檢測(cè)試劑盒
組織亮（leucine）含量高效液相色譜法檢測(cè)試劑盒20次大鼠S100B蛋白elisa檢測(cè)試劑盒
血液亮（leucine含量高效液相色譜法檢測(cè)試劑盒20次大鼠幽門螺旋菌IgGelisa檢測(cè)試劑盒
體液亮（leucine）含量高效液相色譜法檢測(cè)試劑盒20次大鼠戊糖elisa檢測(cè)試劑盒
植物亮（leucine）含量高效液相色譜法檢測(cè)試劑盒20次大鼠肝脂elisa檢測(cè)試劑盒
通用型賴（lysine）含量化學(xué)比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠γ干擾elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞賴（lysine）含量化學(xué)比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠Ⅰ型膠原elisa檢測(cè)試劑盒
組織賴（lysine）含量化學(xué)比色法檢測(cè)試劑盒20次大鼠β-防御elisa檢測(cè)試劑盒
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