操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:生物素標(biāo)記dUTP溶液(0.25mM)
英文名稱:Biotin-11-dUTP
產(chǎn)品規(guī)格:20μl
發(fā)貨周期:1~3天
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來檢測(cè)細(xì)胞在凋亡過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況, 其原理是生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3′-OH末端,并可與連接辣根過氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結(jié)合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)(DAB)的存在下,產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)(呈深棕色),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,因而在普通顯微鏡下即可觀察和計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3′-OH形成,很少能夠被染色。 |
試劑盒組份
組份
Cat:KFS433
儲(chǔ)存條件
Biotin-11-dUTP
20μl
-20℃,避光,12個(gè)月
儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期12個(gè)月
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
酚酞(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Levothyroxine Sodium 表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移2抗體包裝5g
夫拉扎勃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine肉堿氧位基轉(zhuǎn)移抗體包裝100g
夫西地(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine HClIV型膠原α3結(jié)合蛋白抗體包裝25g
夫西地鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine HCl肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1B抗體包裝5g
呋喃雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lisinopril Dihydrate膽固27α羥化抗體包裝25g
呋喃妥因(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lisinopril Dihydrate膽固24α7羥化抗體包裝5g
呋喃西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lobeline Hydrochloride色P450 4A1抗體包裝25g
呋喃唑酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lonidamine色P4504A22抗體(脂肪Ω羥化)包裝5g
呋塞米(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lopinavir周期蛋白依賴性激抑制劑2D抗體包裝1g
伏格列波糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lopinavir膽固24S-羥化包裝5g
伏格列波糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Loratadine豬瘟病抗體包裝100g
伏立康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Loratadine色c氧化亞型2抗體包裝25g
伏立諾他(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Melatonine周期G2抗體包裝5g
胞嘧啶/5-胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Melatonine銅藍(lán)蛋白抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品信號(hào)識(shí)別顆??贵w試劑盒偽原薯蕷皂苷;Pseudoprotodi
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子6試劑盒王不留行黃酮苷;Vaccarin
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5試劑盒烏藥環(huán)戊烯二酮;Methyllind
生物素標(biāo)記dUTP溶液(0.25mM)鹽前黃
其他原黃鹽鹽
英文名稱:Proflavine hydrochloride
其他英文名稱:3,6-Diaminoacridine hydrochloride;Proflavine monohydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:試劑級(jí)
包裝:25克
CAS號(hào):952-23-8
C13H11N3•HCl=245.71
級(jí)別:Reagent grade
含量:≥98.0%
性狀:暗橙色或橙綠色粉末或針狀結(jié)晶。熔點(diǎn)270℃
用途:生化研究。
保存:RT。保質(zhì)期5年