詳細介紹
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細胞00μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱:Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細胞凋亡誘導劑)
英文名稱:Cisplatin 產品規(guī)格:50mg Cisplatin 是一種無機的水溶性的鉑配合物,通過形成DNA 交聯(lián)劑抑制DNA 合成。 Cisplatin 通過與DNA 相互作用形成DNA 交聯(lián)劑誘導細胞毒性,激活多條信號轉導通路, 包括Erk, p53, p73, 和MAPK,其中對激活凋亡影響大。Cisplatin (30 mM)處理HeLa 細胞6小時,顯著激活Erk,持續(xù)到隨后的14個小時期間。Cisplatin 還具有有效的抗腫瘤活性,誘導腫瘤細胞死亡。Cisplatin 可引起腎小管上皮細胞(RPTC)發(fā)生細胞凋亡,引起細胞收縮,使caspase 3活性提高50倍,磷脂酰絲氨酸外翻提高4倍,染色質凝集和DNA 倍性分別提高5 和15倍。Cisplatin (800 μM)處理RPTC 4個小時,產生細胞壞死的典型特征。 別名:cisplatinum, CDDP, Platinol and Platinol-AQ CAS:15663-27-1 分子式:Cl2H6N2Pt 分子量:300.05 儲存:-20℃,有效期36個月 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
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Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細胞凋亡誘導劑)葡聚糖T40
其他葡聚糖D40;右旋糖酐40
英文名稱:Dextran T40
其他英文名稱:Mucrose;Glucose polymer
產品規(guī)格:BR,分子量4萬
包裝:10克/100克/500克
CAS號:9004-54-0
分子式:(C6H10O5) n
分子量:~40000
級別:BR
鑒別:呈正反應
氯化物:≤0.1%
干燥失重:≤7.0%
重金屬:≤10ppm
性狀:粉末,不溶于乙,在中性溶液中很穩(wěn)定,遇強及升高溫度下被水解,在堿性溶液中端基能被氧化。易溶于水。無臭,無味。其溶液可在100-115℃熱壓30-45min。葡聚糖存在于某些微生物生長過程中分泌的粘液中。主要由D葡萄喃糖以α,1→鍵連接,支鏈點有1-→2,1→3,1→4連接。隨著微生物種類和生長條件的不同,其結構也有差別
用途:生化研究。細胞研究,沉淀反應,從全血中分離白細胞。學研究。滲透性研究。惰性膠體已占容積和生物細胞壁體積的測定。
保存:RT,保質期5年