詳細(xì)介紹
商品介紹:
CFSE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細(xì)胞增殖檢測和細(xì)胞熒光示蹤的檢測試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細(xì)胞增殖檢測方法。 |
基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測結(jié)果*一致,但同時可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù),同時如果和其它熒光探針聯(lián)用,可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。
CFDA SE 的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester,分子式為C29H19NO11,分子量為557.47。CFDA SE可以通透細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE,CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng),并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時,即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定,穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達(dá)數(shù)個月。CFSE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一,比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一,并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。
由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定,每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會減弱一半,這樣通過流式細(xì)胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細(xì)胞,分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強度),分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強度),分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。
CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測,也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測,甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
CFSE Cell Proliferation and Tracking Kit | 1000T | 1~3天 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)elisa試劑盒英文名稱:PⅢNP ELISA Kitβ分泌酶抗體包裝5g
Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)elisa試劑盒英文名稱:PⅢNT ELISA Kit相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體包裝100ml
Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)elisa試劑盒英文名稱:HPCⅢ ELISA KitBax包裝25ml
Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa試劑盒英文名稱:Col Ⅲ ELISA Kit程序性死亡配體2抗體包裝500ml
Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)elisa試劑盒英文名稱:HELIX-Ⅱ ELISA Kit膽汁鹽輸出泵/ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白11抗體包裝1g
Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa試劑盒英文名稱:CTX-Ⅱ ELISA Kitβ2微球蛋白抗體(單抗)包裝1g
Ⅱ型膠原(ColⅡ)elisa試劑盒英文名稱:ColⅡ ELISA Kit骨/軟骨蛋白多糖1抗體包裝5g
Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)elisa試劑盒英文名稱:Col Ⅱ ELISA Kit染色體相關(guān)蛋白CAP抗體包裝1g
Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)elisa試劑盒英文名稱:PⅠCP ELISA KitBcl-2同源結(jié)構(gòu)域樣蛋白1抗體包裝250mg
Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)elisa試劑盒英文名稱:PⅠNP ELISA KitBcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體包裝10g
Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)elisa試劑盒英文名稱:CⅠCP ELISA Kit半乳糖轉(zhuǎn)移酶7亞基β1,4抗體包裝50g
Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)elisa試劑盒英文名稱:ⅠCTP ELISA KitBEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝100g
Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)elisa試劑盒英文名稱:NTX ELISA Kit巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS5抗體包裝25g
Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa試劑盒英文名稱:CTX-Ⅰ ELISA Kit癌相關(guān)蛋白1抗體包裝500g
Ⅰ型膠原(ColⅠ)elisa試劑盒英文名稱:ColⅠ ELISA Kit腦蛋白CG6抗體包裝1g
膽汁結(jié)合蛋白DDH2抗體促狀腺素胚胎因子(TEF)PX-478 是有抗癌活性的缺氧誘導(dǎo)因子-1α (HIF-1α) 抑制劑,對一些癌系 IC50 為 20-30 μM。
CFDA,SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒硬脂鈣
其他 十八鈣鹽;十八鈣;SCD潤滑劑
英文名稱: Calcium stearate
其他英文名稱: Octadecanoic acid calcium salt
產(chǎn)品規(guī)格: CP
包裝:250克/1公斤/5公斤
CAS號:1592-23-0
C36H70CaO4=607.02
級別:CP
含量(以Ca計):6.6~7.4%
干燥失重:≤3.0%
重金屬:≤0.004%
性狀:顆粒狀或脂肪性粉末。遇或堿分解。易溶于熱吡啶,微溶于熱乙、熱的植物油和礦油,幾乎不溶于水、、酮和冷乙。熔點179~180℃。
用途:生化研究。防水劑。潤滑劑。聚氯乙烯樹脂穩(wěn)定劑
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