詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:油菜內(nèi)源基因核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管
產(chǎn)品貨號(hào):FS-02R6689
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.2PCR管
產(chǎn)品分類:小宗農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)系列(Gm10)PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
MCP-3/CCL7/FITC 熒光標(biāo)記單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體(人)IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
TIMP-2/FITC 熒光標(biāo)記金屬蛋白組織抑制因子-2抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACSL1 長(zhǎng)鏈脂肪A連接1/2抗體 0.2ml
Rabbit Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗IgG 0.1ml
Gemin 6 脊髓性肌癥蛋白Gemin6抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Bov IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗IgG 0.1ml
TIMP-2/FITC 熒光標(biāo)記金屬蛋白組織抑制因子-2抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Human c-sis ELISA Kit 人c-sisMulti-class antibodies: 48T
Phospho-Histone H3 (Ser28) 磷化組蛋白3抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Metallothionein 3 金屬硫蛋白3抗體 0.2ml
NAG(Human N-acetyl- Beta-D-glucosaminidase) ELISA Kit 人N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷 96T
REC8 減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體 0.2ml
CD39 CD39抗體 0.2ml
Phospho-Histone H3 (Ser28) 磷化組蛋白3抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit horse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.1ml
GDNFRA GDNF家族受體α-1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh AKD1 腺苷激結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
lamin C/FITC 熒光標(biāo)記核纖層蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgM/PE PE標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml
GRIM19/FITC 熒光標(biāo)記干擾/維甲誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
油菜內(nèi)源基因核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管大鼠絨毛膜促性腺(CG)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠粒集落因子受體(GCSFR)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)elisa檢測(cè)試劑盒
雌酮(E1)elisa檢測(cè)試劑盒
17羥孕酮(17-OHP)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠胱天蛋白9(CASP9)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠胰淀(IAPP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠新蝶呤 (Neopterin)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠生長(zhǎng)(GH)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠游離睪酮(F-TESTO)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠核糖核III(RNASEN)elisa檢測(cè)試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。