儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
真核翻譯起始因子4G抗體Aromadendrane-4β,10α-diol別名: 4β,10α-Aromadendranediol分子式: C15H26O2性狀: Powder純度: 99.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 香木蘭烷；中藥對(duì)照品；中藥標(biāo)準(zhǔn)品；植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

β4整合素結(jié)合蛋白抗體Eupatolide別名: 分子式: C15H20O3性狀: Powder純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 細(xì)胞毒活性；澤蘭屬；吉瑪烷；吉馬烷；中藥對(duì)照品；中藥標(biāo)準(zhǔn)品；植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

食道癌相關(guān)基因4蛋白抗體Curcumenone別名: 分子式: C15H22O2性狀: Oil純度: 93.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 中藥對(duì)照品；中藥標(biāo)準(zhǔn)品；植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

紅細(xì)胞生成素抗體β-Rotunol別名: 分子式: C15H22O2性狀: Powder純度: 97.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 莎草；桉葉烷；中藥對(duì)照品；中藥標(biāo)準(zhǔn)品；植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

胞漿環(huán)氧化物水解酶抗體Armisinin別名: Arannuin; Qinghaosu; Qing Hau Sau分子式: C15H22O5性狀: Powder純度: 98.5%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 中藥對(duì)照品；中藥標(biāo)準(zhǔn)品；植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

雌激素受體相關(guān)蛋白3抗體Eudesma-4(15),7(11)-dien-8-one別名: Selina-4(15),7(11)-dien-8-one分子式: C15H22O性狀: Oil純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 中藥對(duì)照品；中藥標(biāo)準(zhǔn)品；植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

雌激素相關(guān)受體β抗體Guajadial別名: 分子式: C30H34O5性狀: Powder純度: 98.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)

上皮細(xì)胞膜蛋白2抗體4α,8β-Dihydroxy-3α-(2-hydroxy-3-acetoxy-2-methylbutyryloxy)eudesm-7(11)-en-12,8α-olide別名: 分子式: C22H32O9性狀: Powder純度: 97.5%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報(bào)告關(guān)鍵詞: 植物提取物；天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物庫(kù)
轉(zhuǎn)基因品系大豆G94-19探針?lè)╭PCR試劑盒TLC法鑒別98%100mlInterleukin 32,IL32 ELISA Kit

甲鈷 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Mecobalamin

AGEs ELISA Kit  大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物CAS號(hào)：92923574 抗腦血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體檢測(cè)試盒500ml胰蛋白酶檢測(cè)試盒Insulin

5g1g5溴尿苷FAT;CD36

 大腸桿菌 Escherichia coliL-Glutamine (100X)

IL12/P70(Human Interleukin 12) ELISA KIT  人白介素12CAS號(hào)：92842 肌酐酶檢測(cè)試盒100ml胰島素檢測(cè)試盒Insulinlikegrowthfactor1

25g500ml5溴尿苷guasine mophosphate

右旋洛芬氨丁三醇 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR (S)-Ketoprofen trometamol

百得OEM的genex移液器495023−20°C干燥避光保存N酰L蛋氨HPLC≥98%型肝炎病核心抗體IgM檢測(cè)試盒20mgP53Ab標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 蒼術(shù)苷A

服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

P物質(zhì)(SP)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Substance P (SP) 96T Rattus norvegicus (Rat)
組織因子通道抑制因子(TFPI)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) 96T Homo sapiens (Human)
組織因子通道抑制因子(TFPI)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) 96T Mus musculus (Mouse)
脫氫表雄酮(DHEA)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Dehydroepiandrosterone (DHEA) 96T General
視黃醇結(jié)合蛋白1(RBP1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Retinol Binding Protein 1, Cellular (RBP1) 96T Homo sapiens (Human)
神經(jīng)激肽A(NKA)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Neurokinin A (NKA) 96T Homo sapiens (Human)
血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGFAB)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Platelet Derived Growth Factor AB (PDGFAB) 96T Homo sapiens (Human)
C-肽(C-Peptide)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for C-Peptide 96T Homo sapiens (Human)
C-肽(C-Peptide)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for C-Peptide 96T Mus musculus (Mouse)
C-肽(C-Peptide)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for C-Peptide 96T Rattus norvegicus (Rat)
胰島素(INS)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Insulin (INS) 96T Canis familiaris; Canine (Dog)
胰島素(INS)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Insulin (INS) 96T Chicken (Gallus)
胰島素(INS)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Insulin (INS) 96T Homo sapiens (Human)
甲狀腺素(T4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Thyroxine (T4) 96T General
三碘甲狀腺原氨酸(T3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Triiodothyronine (T3) 96T General
雌三醇(E3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Estriol (E3) 96T General
睪酮(Testosterone)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Testosterone 96T General
孕酮(Pg)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Progesterone (Pg) 96T General
雌二醇(E2)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Estradiol (E2) 96T General
皮質(zhì)醇(Cortisol)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Cortisol 96T General
心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3) 96T Homo sapiens (Human)
肌紅蛋白(MYO)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Homo sapiens (Human)
肌紅蛋白(MYO)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Mus musculus (Mouse)
肌紅蛋白(MYO)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
肌紅蛋白(MYO)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Myoglobin (MYO) 96T Rattus norvegicus (Rat)
內(nèi)皮素1(EDN1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Homo sapiens (Human)
內(nèi)皮素1(EDN1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Mus musculus (Mouse)
內(nèi)皮素1(EDN1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Rattus norvegicus (Rat)
氨基端前腦鈉素(NT-ProBNP)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for N-Terminal Pro Brain Natriuretic Peptide (NT-ProBNP) 96T Homo sapiens (Human)
鐵蛋白(FE)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Ferritin (FE) 96T Equus caballus; Equine (Horse)
鐵蛋白(FE)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Ferritin (FE) 96T Homo sapiens (Human)
載脂蛋白A1(APOA1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1) 96T Homo sapiens (Human)
組織因子(TF)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor (TF) 96T Homo sapiens (Human)
組織因子(TF)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor (TF) 96T Mus musculus (Mouse)
纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1) 96T Homo sapiens (Human)
髓鞘堿性蛋白(MBP)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Myelin Basic Protein (MBP) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
髓鞘堿性蛋白(MBP)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Myelin Basic Protein (MBP) 96T Homo sapiens (Human)

HSC 人雪旺細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HPC 人神經(jīng)束膜細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HDMEC 人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HDLEC 人真皮淋巴內(nèi)皮細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HDMEC-a 人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HDVSMC 人真皮血管平滑肌細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HEK-n 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-新生 5 x 10^5 cells/vial
HEK-a 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HEK-f 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-胎兒 5 x 10^5 cells/vial
HEM-l 人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素 5 x 10^5 cells/vial
HEM-m 人表皮黑色素細(xì)胞-中色素 5 x 10^5 cells/vial
HEM-d 人表皮黑色素細(xì)胞-深色素 5 x 10^5 cells/vial
HEM-a 人表皮黑色素細(xì)胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
牛赤羽病毒RT-LAMP檢測(cè)試劑盒HEM-f 人表皮黑色素細(xì)胞-胎兒 5 x 10^5 cells/vial
HDF-f 人真皮成纖維母細(xì)胞-胎兒 5 x 10^5 cells/vial
HDF-n 人真皮成纖維母細(xì)胞-新生 5 x 10^5 cells/vial
HDF-a 人真皮成纖維母細(xì)胞-成人 5 x 10^5 cells/vial
HHDPC 人毛乳頭細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HHGMC 人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HHORSC 人毛囊外根鞘細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。