操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱:MEK抑制劑(PD0325901)
英文名稱:PD0325901 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg PD0325901是一種具有選擇性的的,ATP非競爭性的MEK抑制劑,IC50值為0.33nM,是CI-1040對ERK1和ERK2磷酸化作用的500多倍。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:391210-10-9 別名:PD325901 純度:99.95% 分子量:482.19 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
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豬丹毒絲菌Erysipelothrix│rhuriopathiae 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BCC1q/TNF相關(guān)蛋白3試劑盒對氧基
聚生殼菌Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRB因子試劑盒丁香油
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis Berliner 質(zhì)量規(guī)格:BSB受體相關(guān)蛋白31試劑盒橙皮油內(nèi)酯
MEK抑制劑(PD0325901)牛胰島
英文名稱:Insulin from bovine pancreas
產(chǎn)品規(guī)格:BR,27U/mg
包裝:25毫克/100毫克/1克
CAS號:11070-73-8
C254H377N65O75S6=5733.49
級別:BR
含量:≥27 USP units/mg (HPLC)
干燥失重:≤10.0%
性狀:粉末。在水、乙、中幾乎不溶;在礦(無機(jī))或氫氧化堿溶液中易溶。由A、B兩個肽鏈組成。堿性: 兩性,等電點(diǎn)pI5.35~5.45
用途:生化研究。胰島是機(jī)體內(nèi)降低血糖的,也是同時促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的。作用機(jī)理屬于受體酪激機(jī)制。
保存:-20°C