詳細(xì)介紹
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:創(chuàng)傷弧菌核酸檢測試劑盒48T 0.1PCR管
產(chǎn)品貨號:FS-02R6344
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.1PCR管
產(chǎn)品分類:PCR-熒光探針法/PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
Phospho-MK6 (Ser202)/FITC 熒光標(biāo)記磷化原活化蛋白激MKK6抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
TRAF3/CD40bp /FITC 熒光標(biāo)記CD40結(jié)合蛋白/CD40受體相關(guān)因子1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABHD3 肺α/β解蛋白3抗體 0.2ml
Rabbit Avidin/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗親和 0.1ml
GRB10 生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RAB8 ras癌基因家族Rab8蛋白抗體(原癌基因c MEL) 0.1ml
TRAF3/CD40bp /FITC 熒光標(biāo)記CD40結(jié)合蛋白/CD40受體相關(guān)因子1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Human Amylin ELISA Kit 人胰淀Multi-class antibodies: 48T
Iba1 離子鈣接頭蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAPK organizer 1/Morg1 原活化蛋白激組織蛋白1抗體 0.1ml
WARS(Human tryptophanyl-tRNA synthetase) ELISA Kit 人色酰tRNA合成 96T
RIP3 受體結(jié)合絲蘇激3抗體 0.2ml
phospho-Caldesmon (Ser789) 磷化鈣介質(zhì)抗體 0.1ml
Iba1 離子鈣接頭蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit dog IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.5ml
Cancer/testis antigen family 4 member 7 /抗原家族4亞型7抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADCK4 ADCK4蛋白抗體 0.2ml
Lysozyme/FITC 熒光標(biāo)記溶菌抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.3ml
phospho-Tau protein (Ser396)/FITC 熒光標(biāo)記磷化微管相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
創(chuàng)傷弧菌核酸檢測試劑盒48T 0.1PCR管通用型總番茄斑萎病毒(Total Tospo Virus;TOSPO)基因檢測試劑盒 20次大鼠生長釋放多肽elisa檢測試劑盒
通用型南瓜黃化花葉病毒(Zucchini Yellow Mosaic Virus;ZYMV)20次大鼠抗內(nèi)皮抗體elisa檢測試劑盒
基因檢測試劑盒大鼠白介23elisa檢測試劑盒
通用型瓜類性果斑?。ㄎ鞴瞎撸?/span>Acidovorax avenae subsp. citrulli;Watermelon Fruit Blotch)基因檢測試劑盒20次大鼠骨橋elisa檢測試劑盒
通用型胡蘿卜性葉斑?。?/span>Xanthomonas campestris pv. Carotae;Xccar)基因檢測試劑盒20次大鼠周期D3elisa檢測試劑盒
通用型野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris pv. Pelargonii;Xcp)20次大鼠甲狀旁腺elisa檢測試劑盒
基因檢測試劑盒大鼠血管生長elisa檢測試劑盒
通用型加拿大低菜籽油黑脛病/油菜腐爛病/甘藍(lán)黑莖病菌(Blackleg of Canola/Leptosphaeria maculans/Phoma lingam)基因檢測試劑盒20次大鼠血紅氧合2elisa檢測試劑盒
通用型疫病菌種(Phytophthora species)基因檢測試劑盒20次大鼠前列腺E1elisa檢測試劑盒
通用型絲核菌種(Rhizoctonia species)基因檢測試劑盒20次小鼠活化蛋白Celisa檢測試劑盒
通用型腐霉屬種(Pythium species)基因檢測試劑盒20次大鼠色Celisa檢測試劑盒
通用型灰斑病灰梨孢菌(Grey Leaf Spot Pyricularia grisea)20次小鼠骨形成蛋白elisa檢測試劑盒
基因檢測試劑盒小鼠胰島elisa檢測試劑盒
通用型蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)基因檢測試劑盒20次小鼠磷化蛋白Celisa檢測試劑盒
通用型籽瓜性果斑?。?/span>Acidovorax avenae subsp.citrulli;Aac)20次小鼠同型半胱elisa檢測試劑盒