操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:Porcupine抑制劑(GNF-6231)
英文名稱:GNF-6231 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 發(fā)貨周期:1~3天 GNF-6231是一個(gè)強(qiáng)的,有選擇性的,能夠Porcupine抑制劑能夠阻止Wnt信號(hào)通路。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1243245-18-2 純度:98.0% 分子量:448.49 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
大腸埃希菌Bensingtonia sp.
分枝節(jié)桿菌Bensingtonia sp.
硫磺色節(jié)桿菌Bensingtonia sp.
黃色籃狀菌Cryptococcus aureus
長(zhǎng)雙歧桿菌Saccharomyces cerevisiae
草木棲劍菌Candida pseudorugosa
Lysinibacillus xylanilyticusSaccharomyces cerevisiae
Cryptococcus sp.
慢生根瘤菌Saccharomyces vini
基生梭孢殼Hansenula sp.
蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種Candida etlica
彎孢菌Candida utilis
綠色木霉Hansenula saturnus
黃曲霉Torulopsis candida
節(jié)狀鐮孢Saccharomyces sp.
柔嫩艾美耳球蟲(chóng)Candida sp.
小鼠多巴D1受體(D1R)免疫試劑盒β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體人抗天然脫氧核糖核抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒羥基紅花黃色A
小鼠多巴(DA)免疫試劑盒β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體人抗天然脫氧核糖核抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒羥基積雪草苷
小鼠端粒(TE)免疫試劑盒癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒羥基積雪草
小鼠蕈堿型乙酰膽堿受體M2(mAChRM2)自身抗體免疫試劑盒血型抗原前體蛋白抗體人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒羥基酪
Porcupine抑制劑(GNF-6231)BOC-D-谷
其他N-叔丁氧羰基-D-谷
英文名稱:BOC-D-Glutamic acid
其他英文名稱:BOC-D-Glu-OH
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:10克/25克/100克
CAS號(hào):34404-28-9
C10H17NO6=247.25
級(jí)別:BR
含量:≥99.0%
比旋光度:+14~+15°(C=1,CH3OH)
性狀:至類結(jié)晶粉末。
用途:生化研究。
保存:RT