詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào):FS-02R6346
產(chǎn)品規(guī)格:48T 0.1PCR管
產(chǎn)品分類(lèi):PCR-熒光探針?lè)?PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
HSP-27 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白27Multi-class antibodies: 48T
TRAF2 壞死因子受體相關(guān)因子2抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GLB1L3 β半乳糖苷1樣蛋白3抗體 0.2ml
GP- II b III a/CD41+CD61 ELISA Kit 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa 96T
phospho-NIPA(Ser354) 磷化間變性瘤激核相互作用伴侶蛋白抗體 0.1ml
Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗體 0.2ml
TRAF2 壞死因子受體相關(guān)因子2抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
BRCA-2(Human breast cancer susceptibility protein 2) ELISA Kit 人癌易感蛋白2Multi-class antibodies: 48T
HIF-1 Beta/ARNT1 缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MFAP3L 微絲相關(guān)蛋白3樣抗體 0.1ml
PKC(Human protein kinase C) ELISA Kit 人蛋白激C 96T
RIP1 受體相互作用蛋白激1抗體 0.1ml
C6orf132 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框132抗體 0.2ml
HIF-1 Beta/ARNT1 缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit dog IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml
GLRB 甘受體β/GlyR β抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADCY1 腺苷環(huán)化1抗體 0.2ml
LY-86/MD-1/FITC 熒光標(biāo)記MD-1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
Tau protein/FITC 熒光標(biāo)記微管相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.1PCR管通用型稻白葉枯病野油菜假單孢菌稻變種(Xanthomonas campestris pv.oryzae;Xco)基因檢測(cè)試劑盒20次小鼠游離脂肪elisa檢測(cè)試劑盒
通用型野油菜黃單胞菌菜豆疫病致病變種(Xanthomonas campestris pv.pelargonii;Xcp)基因檢測(cè)試劑盒20次小鼠鈣通道阻滯劑elisa檢測(cè)試劑盒
通用型野油菜黃單胞菌菜豆疫病致病變種(Xanthomonas campestris pv.phaseoli;Xcph)基因檢測(cè)試劑盒20次小鼠骨保護(hù)配體elisa檢測(cè)試劑盒
通用型番茄瘡痂病辣椒斑點(diǎn)病菌(Xanthomonas campestris pv.vesicatoria;Xcv)基因檢測(cè)試劑盒20次小鼠血漿α顆粒膜蛋白elisa檢測(cè)試劑盒
通用型角胡麻葉斑病嗜麥芽黃黃單胞菌(Xanthomonas maltophilia;Xm)基因檢測(cè)試劑盒20次小鼠睪酮elisa檢測(cè)試劑盒
通用型柑桔枯萎病茍養(yǎng)木桿菌(Xylella fastidiosa;Xf)20次小鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白αelisa檢測(cè)試劑盒
基因檢測(cè)試劑盒小鼠磷肌醇3elisa檢測(cè)試劑盒
通用型甘薯黑斑?。?/span>Ceratocystis fimbriata)基因檢測(cè)試劑盒20次小鼠熱休克蛋白60elisa檢測(cè)試劑盒
通用型B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠糖皮質(zhì)受體βelisa檢測(cè)試劑盒
血液B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠游離睪酮elisa檢測(cè)試劑盒
食物B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠降鈣基因相關(guān)肽elisa檢測(cè)試劑盒
植物B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠顆粒Belisa檢測(cè)試劑盒
B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠解脲脲原體抗體elisa檢測(cè)試劑盒
酵母B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠血管緊張Ⅰelisa檢測(cè)試劑盒
體液B1比色法檢測(cè)試劑盒20次小鼠色Celisa檢測(cè)試劑盒