轉(zhuǎn)基因品系玉米MS 6染料法qPCR試劑盒注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系玉米MS 6染料法qPCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
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產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)，無(wú)非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
服務(wù)流程：
1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）
2、抽提DNA、RNA，并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄
3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR
4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測(cè)數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)
5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
細(xì)菌甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質(zhì)譜法定量　ZNF284 　20 ul

通用性5－磷酸甲羥戊酸（ mevalonate 5-phosphate）含量高效液相層析-質(zhì)譜法定量　TYR(Tyrosinase) 　300 ul

通用性5－焦磷酸甲羥戊酸（mevalonate 5-pyrophosphate）含量高效液相層析-質(zhì)譜法定量　ZNF211 　100 ul

細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶比色法定量　ZNF287 　250 ul

組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶比色法定量　ZNF215 　250 ul

血液3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶比色法定量　ZNF3 　250 ul

細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）合成酶活性比色法定量　ZNF23 　250 ul

組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）合成酶活性比色法定量　ZNF232 　250 ul

血液3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）合成酶活性比色法定量　ZNF238 　100 ul

細(xì)胞甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性定量　ZNF253 　250 ul

組織甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性定量　ZNF24 　250 ul

血液甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性定量　ZNF251 　250 ul

真菌/酵母甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性定量　ZNF256 　250 ul

植物甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性定量　L1CAM(Neural cell adhesion molecule L1) 　100 ul

細(xì)菌甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性定量　ZMAT2 　100 ul

細(xì)胞磷酸甲羥戊酸激酶（phosphomevalonate kinase）活性比色法定量　ZIC4 　100 ul
轉(zhuǎn)基因品系玉米MS 6染料法qPCR試劑盒Pseudomonas│frederiksbergensis Andersen et al.分離基物: 楊樹(shù)林緣根系土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 141生長(zhǎng)條件: 30存儲(chǔ)條件: 定期移植法

巴西固氮螺菌種屬: Azospirillum brasilense提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 固氮培養(yǎng)基：KH2PO4 0.2 g,K2HPO4 0.8 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,CaSO4·2H2O 0.1 g,FeCl3 微量,Na2MoO4·2H2O 微量,酵母提取物 0.5 g,甘露醇 20.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.2。傳代方法: ①凍干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂輪在凍干管壁劃兩圈，掰斷，用200μL無(wú)菌或培養(yǎng)基充分溶解，平板涂布，活化培養(yǎng)。

②斜面：試管口用75%酒精擦拭后，火焰灼燒，后用無(wú)菌接種鏟切塊，挑取接入平板或斜面，培養(yǎng)。生長(zhǎng)條件: 30℃，好氧生長(zhǎng)特性: 革蘭氏陰性、微好氧、固氮存儲(chǔ)條件: 2-8℃冷藏。液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Trichothecium│roseum分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分解纖維素培養(yǎng)基: 0014生長(zhǎng)條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Penicillium│variabile分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長(zhǎng)條件: 25℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Streptomyces│sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物模式菌株: no培養(yǎng)基: 38生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Streptomyces│sp.分離基物: 表面土壤提供形式: 其他安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分類學(xué)及微生物藥物學(xué)的研究培養(yǎng)基: 12生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 其他

鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 啤酒菌。培養(yǎng)基: CM0077生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

Vibrio│splendidus分離基物: 底層海（深20米）提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: potential antifouling 潛在的抗污損活性培養(yǎng)基: 467生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。