操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:glutaminase抑制劑(BPTES)
英文名稱:BPTES 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg BPTES是一種有效的glutaminase抑制劑,用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):314045-39-1 純度:98.50% 分子量:524.68 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
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鏈狀假絲酵母Candida│catenulata 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99.5%L-絲
彩色豆馬勃Pisolithus│tinctorius (Pers.) Coker & Couch 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)L-色
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)L-鼠李糖
glutaminase抑制劑(BPTES)卵磷脂(大豆)
其他 大豆卵磷脂;磷脂酰膽堿;L-a-磷脂酰膽酰;蜂王漿
英文名稱: SPC
其他英文名稱: Lecithin(soy beans);L-alpha-Phosphatidyl choline
產(chǎn)品規(guī)格: BR,PC=26%
包裝:250克/1公斤
產(chǎn)品規(guī)格: 高純,PC=90%
包裝:25克
CAS號(hào):8002-43-5
級(jí)別:BR
純度(以不溶物計(jì)):≥97%
磷脂酰膽堿(PC):26%
磷脂酰乙胺(PE):20%
磷脂酰肌(PI):14%
磷脂酰絲胺(PS):4%
膽堿:3.6%
?。?/span>2.2%
植物糖酯:13%
其他磷脂:14.5%
碳水化合物:8.0%
HLB值:7%
級(jí)別:High purity grade
磷脂酰膽堿(PC):≥90.0%
值:≤35mg KOH/g
水分:≤1.0%
性狀:淺黃色至黃棕色粉末,易吸潮,易分散并膨脹于水,不溶于,溶于,部分溶于乙等有機(jī)溶劑
用途:生化研究。用做乳化劑、潤(rùn)滑劑,亦可作為磷脂和必須脂肪的來源
保存:RT,避光