人食管成纖維細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠垂體促甲狀腺濾泡星狀細(xì)胞TtT/GF(種屬鑒定)人肺腺癌細(xì)胞LTEP-α-2(STR鑒定正確)小鼠乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染4T1+OVA(STR鑒定正確)大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元瘤細(xì)胞 VSC4.1（種屬鑒定）人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫細(xì)胞U251MG+TMZ+luc(STR鑒定正確)人正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE-2(STR鑒定正確)人結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞SW1417(STR鑒定

一、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：食管組織

種屬來源：人

細(xì)胞簡介：食管是咽和胃之間的消化管，哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層:黏膜層、黏 膜下層、肌層、外膜。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，其中外膜主 要都是成纖維細(xì)胞構(gòu)成的疏松結(jié)締組織，  食管通過其與食管周圍的器官相連。黏  膜下層,為厚的疏松結(jié)締組織構(gòu)成,內(nèi)部包含食管腺，  可分泌粘液排入食管腔。  食管 癌的發(fā)生中由正常成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來的活化的癌相關(guān)纖維母細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)微 環(huán)境內(nèi)的主要效應(yīng)細(xì)胞，  研究證實(shí)，  包括食管癌在內(nèi)的多種腫瘤組織內(nèi)的癌相關(guān) 纖維母細(xì)胞，與正常成纖維細(xì)胞相比，在形態(tài)結(jié)構(gòu)、生長方式、增殖活性、運(yùn)動(dòng) 能力等發(fā)面均發(fā)生了顯著變化，  并且能夠分泌大量的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、血管新 生的信號分子以介導(dǎo)上皮-間質(zhì)之間復(fù)雜的相互作用。

培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞

傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣，95%；CO2 ，5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

人食管成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維樣細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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