化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
人冠狀動脈平滑肌細胞
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：人冠狀動脈平滑肌細胞分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型、均衡型、左優(yōu)勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支。左冠狀動脈為一短干，發(fā)自左主動脈竇，經(jīng)肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。它是構(gòu)成冠狀動脈壁的主要細胞成分，細胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的復(fù)極化、超極化，調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖、炎癥及凋亡等。因此，原代分離培養(yǎng)的冠狀動脈平滑肌細胞，對研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機制具有非常重要的作用。冠狀動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 人冠狀動脈平滑肌細胞 | 商品貨號 | A01X1272 |
組織來源 | 冠狀動脈 | 種屬來源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人小氣道上皮細胞 | 大鼠脾淋巴細胞 |
Histone H3.3重組兔單克隆抗體 | MERTK重組兔單克隆抗體 |
人乳腺癌成纖維細胞 | 單體櫻桃紅熒光蛋白標簽抗體 |
小鼠骨髓單核細胞 | C-藻藍/藻藍蛋白/藻青蛋白抗體 |
大鼠淋巴結(jié)淋巴細胞 | Avi-Tag 抗體 |
人乳腺癌血管周細胞 | 磺胺抗體 |
小鼠海綿體內(nèi)皮細胞 | 磷化酪氨抗體 |
大鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細胞 | 三聚氰胺單克隆抗體 |
人椎間盤纖維環(huán)細胞 | 雄激受體單克隆抗體 |
小鼠骺軟骨細胞 | 重組程序性死亡配體1兔單克隆抗體 |
大鼠胚肺成纖維細胞 | 磷化NF-κB活化激重組兔單克隆抗體 |
人肝外膽管上皮細胞 | 人冠狀動脈平滑肌細胞自噬相關(guān)蛋白9A重組兔單克隆抗體 |
小鼠呼吸道上皮細胞 | SUN2重組兔單克隆抗體 |
大鼠胚胎成纖維細胞 | 冠狀病毒2核衣殼蛋白單克隆抗體 |
小鼠肌腱干細胞 | 細胞色c氧化IV重組兔單克隆抗體 |
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
化工儀器網(wǎng)