詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:溫和氣單胞菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:FS-02R6483
產(chǎn)品規(guī)格:48T
產(chǎn)品分類:水產(chǎn)養(yǎng)殖病害檢測系列(恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
visfatin ELISA Kit 大鼠內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪Multi-class antibodies: 48T
TRBF1/TRF1 端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GIRK3/KCNJ9 G蛋白激活內(nèi)向鉀通道3抗體 0.1ml
NP-Y(Human neuropeptide Y) ELISA Kit 人神經(jīng)肽Y 96T
NRARP NOTCH調(diào)節(jié)錨蛋白抗體 0.2ml
ARIP2a 激活受體2A抗體 0.2ml
TRBF1/TRF1 端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Human histone H2A-H2B-DNA autoantibody ELISA Kit 人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體Multi-class antibodies: 48T
Insulin 胰島蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh LIR-8/CD85c/LILRB5 白細(xì)胞球蛋白樣受體8抗體 0.2ml
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit 人膽磷甘油酯 96T
RMND1 減數(shù)分裂同源蛋白1抗體 0.2ml
C12ORF29 12號染色體開放閱讀框29抗體 0.2ml
Insulin 胰島蛋白抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit chicken IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1ml
GANAB α葡萄糖苷2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ADAMTSL1 整合樣金屬蛋白與樣1蛋白抗體 0.2ml
MAdCAM-1/FITC 熒光標(biāo)記粘膜血管定居因子抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
TBX3/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
溫和氣單胞菌PCR檢測試劑盒細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次大鼠通道蛋白0elisa檢測試劑盒
pcr試劑盒大鼠胃動elisa檢測試劑盒
組織牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次大鼠B6elisa檢測試劑盒
pcr試劑盒大鼠超敏C反應(yīng)蛋白elisa檢測試劑盒
血液牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次大鼠透明質(zhì)elisa檢測試劑盒
pcr試劑盒大鼠胰蛋白elisa檢測試劑盒
體液牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次小鼠破骨分化因子elisa檢測試劑盒
pcr試劑盒小鼠C反應(yīng)蛋白elisa檢測試劑盒
通用型牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次小鼠球蛋白Aelisa檢測試劑盒
定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒小鼠白介1βelisa檢測試劑盒
細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次大鼠補(bǔ)體蛋白4elisa檢測試劑盒
定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒大鼠D3elisa檢測試劑盒
組織牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次大鼠雌二醇受體elisa檢測試劑盒
定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒大鼠抗Ⅲ抗體elisa檢測試劑盒
血液牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次小鼠肝脂elisa檢測試劑盒