詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腸出血性大腸桿菌O157PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:FS-02R6325
產(chǎn)品規(guī)格:48T
產(chǎn)品分類:恒溫?zé)晒夥?/span>
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨存放。
6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
EMA IgA ELISA Kit 大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgAMulti-class antibodies: 48T
Tsg101 tsg101抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GGPS1 法尼基二磷合1抗體 0.2ml
CXCR3(Mouse CXC-chemokine receptor 3) ELISA KIT 小鼠CXC趨化因子受體3 96T
NCX2 鈉鈣交換蛋白2抗體 0.1ml
KAL1 卡爾曼綜合癥基因1抗體 0.2ml
Tsg101 tsg101抗體Multi-class antibodies: 0.2ml
MCV(Human mutated citrullinated vimentin antibody) ELISA Kit 人抗突變型瓜波形蛋白抗體Multi-class antibodies: 48T
phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) 磷化KB抑制蛋白激α抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MAGEA5 黑色瘤相關(guān)抗原5抗體 0.2ml
Lp-PL-A2(Human lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂A2 96T
RNF185 環(huán)指蛋白185抗體 0.2ml
CYP3A4 細(xì)胞色P450 3A4抗體 0.1ml
phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180) 磷化KB抑制蛋白激α抗體Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit Bov IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗IgG 0.1ml
GSC 同源盒蛋白GSC抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACOT8 ?;鵄硫酯8 0.2ml
TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠肥大細(xì)胞類胰蛋白β2IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Biotin/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗生物抗體IgG 0.1ml
TLK1/FITC 熒光標(biāo)記調(diào)節(jié)染色體組裝激1抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
腸出血性大腸桿菌O157PCR檢測試劑盒通用型豬傳染性胃腸炎/豬呼吸(TGEV/PRCV)20次白色探針法熒光定量PCR試劑盒
基因檢測試劑盒擬桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬圓環(huán)病毒(CIRCOVIRUS)基因檢測試劑盒20次長雙歧桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬輪狀病毒(Porcine rotavirus)基因檢測試劑盒20次海鷗彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬胸膜肺炎(APP)基因檢測試劑盒20次克柔探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬副豬嗜血桿菌(HPS)基因檢測試劑盒20次球孢白僵菌探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型豬布病基因檢測試劑盒20次文氏巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛Q熱?。≦ Fever)基因檢測試劑盒20次牛皰疹病通用探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛腹瀉病毒/臨界病毒(Border Disease;BDV)20次木鼠布魯氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒
基因檢測試劑盒貝氏貝諾孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛新孢子蟲病(Neospora caninum)基因檢測試劑盒20次耳探針法熒光定量PCR試劑盒
通用型牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次脆弱擬桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
pcr試劑盒大腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
細(xì)胞牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhoea Virus;BVDV)20次葡萄孢菌探針法熒光定量PCR試劑盒
pcr試劑盒對蝦桿狀病探針法熒光定量PCR試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。