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豬骨骼肌衛(wèi)星細胞永生化

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    上海市

規(guī)格
1×1063500元15 瓶 可售
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更新時間:2024-04-08 15:46:47瀏覽次數(shù):218

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×106
貨號 A01X1195 主要用途 僅供科研實驗
組織來源 實驗動物的正常肌肉組織 種屬來源
豬骨骼肌衛(wèi)星細胞永生化的相關(guān)產(chǎn)品:人肺大動脈內(nèi)皮細胞SNU-80細胞SNU-81細胞SNU-840細胞SNU-878細胞SNU-886細胞SNU-C1細胞SNU-C2A細胞SNU-C2B細胞SNU-C4細胞SNU-C5細胞SU-DHL-10 細胞SU-DHL-16細胞T3M-4細胞T98G細胞

詳細介紹

一、細胞基本屬性

細胞名稱

豬骨骼肌衛(wèi)星細胞永生化

產(chǎn)品規(guī)格

1×106

商品貨號

A01X1195

細胞詳述

骨骼肌細胞是人和動物體內(nèi)最大的細胞之一,它們是由成肌細胞(Myoblasts)融合而來的多核細胞,故骨骼肌的形成是一個非常復雜的過程,并需要多種細胞信號通路的參與,包括phosphatidylinositol 3-kinase,calcineurin,STAT3和MAPK等。原代骨骼肌細胞的培養(yǎng)是研究細胞分化過程的有效的模型。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項:  收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代,充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,不能用來培養(yǎng)細胞。

細胞特性

1) 組織來源于實驗動物的正常肌肉組織。

2) 細胞鑒定:肌動蛋白(α-actin)免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式:梭形,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

6.jpg

注意事項:

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

原代細胞分離培養(yǎng)的思路:

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。

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