人B淋巴細胞公司正在出售的產(chǎn)品：大鼠骨骼肌成纖維細胞大鼠骨骼肌細胞大鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞大鼠骨髓單核細胞大鼠骨髓基質(zhì)細胞大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞大鼠骨髓來源巨噬細胞ECHO IgM 人艾柯病毒IgMELISA檢測試劑盒RV 人輪狀病毒ELISA檢測試劑盒ADV-IgG 人腺病毒IgGELISA檢測試劑盒ADV-IgM 人腺病毒IgMELISA檢測試劑盒FLU 人流感病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒L

一、細胞基本屬性

 

組織來源：外周血

種屬來源：人

細胞簡介：B淋巴細胞的祖細胞存在于胎肝的造血細胞島中 ，此后B淋巴細胞的產(chǎn)生和分 化場所逐漸被骨髓所代替。成熟的B細胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小 結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi)。  B細胞在抗原刺激下可分化為漿細胞 ， 漿細胞可合成和分泌抗體  (免疫球蛋白)  ，主要執(zhí)行機體的體液免疫。

B細胞在骨髓內(nèi)分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標志 的表達。  B細胞在發(fā)育分化過程中 ，同樣也經(jīng)歷選擇作用 ，以除去非功能性基 因重排B細胞和自身反應(yīng)性B細胞 ，形成周圍成熟的B細胞庫。  B細胞表面有多 種膜表面分子 ，識別抗原、與免疫細胞和免疫分子相互作用 ，也是分離和鑒  別B細胞的重要依據(jù)。  B細胞表面分子主要有白細胞分化抗原、  MHC以及多種 膜表面受體。

培養(yǎng)基：原代B淋巴細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：懸浮培養(yǎng)

傳代特性：根據(jù)細胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

人B淋巴細胞是一種懸浮培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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