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人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×106
貨號(hào) A01X1222 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
組織來源 淋巴管內(nèi)皮 種屬來源
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詳細(xì)介紹

人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱

人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

產(chǎn)品規(guī)格

1×106

商品貨號(hào)

A01X1222

細(xì)胞詳述

淋巴管由毛細(xì)淋巴管匯合而成。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似,但管徑較細(xì),管壁較薄。淋巴管根據(jù)其位置分為淺、深二種。 它們管位于皮下,常與淺靜脈伴行,收集皮膚和皮下組織的淋巴。淋巴管在向心行程中,通常經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)淋巴結(jié),從而把淋巴細(xì)胞帶入淋巴液。淋巴系統(tǒng)對(duì)于維持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,引流組織間隙的體液,免疫功能的發(fā)揮具有重要的意義,這些功能的發(fā)揮與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的功能密切相關(guān)。同時(shí)在炎癥及腫瘤過程中,淋巴管生成參與了組織的修復(fù)及腫瘤的轉(zhuǎn)移。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng):  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1:2傳代,充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路:

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出,經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

6.jpg

實(shí)驗(yàn)步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺(tái)中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

2.png
注意事項(xiàng):

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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