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牛elisa試劑盒流程與標本處理
閱讀：348 發(fā)布時間：2020-12-16牛elisa試劑盒原理：
采用競爭法測定牛elisa試劑盒OXLDL水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板，制成固相載體，實驗時依次在微孔板中加入標本及標準品，并加入HRP標記的OXLDL抗體，標本及標準品中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結(jié)合。反復洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。標本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標抗體愈少，顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負相關(guān)。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度（OD值），根據(jù)標準曲線，計算測試樣品中OXLDL濃度。
牛elisa試劑盒操作流程：
1.即將進行試驗的版孔進行設(shè)定好，規(guī)范品5個點，每個點設(shè)定平行，需求用到10個孔，空白只需1個孔。剩下孔能夠做為樣本孔
2.稀釋規(guī)范，準備好5個EP管，然后在每個EP管中參加150微升規(guī)范稀釋液，編上編碼，分別為1，2，3，4,5，在1號管中參加150規(guī)范品，用槍頭重復吹打10次左右（留意操控起伏不要過大簡單發(fā)生氣泡）如果有渦旋儀能夠在渦旋儀上渦旋5秒左右，然后換槍頭，在1號管中取150微升參加到2號管，后面進程一次類推。終稀釋完，前面4個管中每管液體在150微升，5號管為300微升。濃度是從大到小。
3.規(guī)范、樣本、空白加樣：規(guī)范是每個濃度點2個孔（做平行），每孔參加50微升，加樣進程中留意換槍頭，樣本孔中每孔參加50微升，加樣進程中留意換槍頭，空白孔參加50微升蒸餾水。特別要闡明的是，規(guī)范加樣和樣本加樣盡量操控在15分鐘內(nèi)加完，如果時刻拖的太長，會導致前面孔先反響后面孔才開端反響，這樣數(shù)值誤差過大。加完樣后蓋上封板膜，至37攝氏度孵育30分鐘.
4.洗版，在孵育進程中能夠?qū)⑾礈煲号浜茫?0ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或許去離子水定容到600ml即可。每孔參加250-300微升的洗滌液（不要漫過版孔），（如果有震動儀的話，能夠講板子放入震動儀上5秒左右，然后靜止三十秒，沒有請疏忽次進程）將板子在桌子上晃動5秒左右，然后靜置30秒，甩干，決定。闡明：甩干進程盡量要快，1秒內(nèi)就能夠完結(jié)，不要漸漸歪斜倒掉液體，直接翻板甩掉液體即可。決定進程需求在桌子上墊一層吸水紙或許濾紙，版孔朝下拍幾下，拍干差異主要看吸水紙和濾紙上沒有顯著的水漬為完結(jié)。
5.每孔參加50微升的酶標試劑，此處在空白孔中不需求加（空白孔為空），孵育30分鐘。
6.洗版同進程4
7.顯色，先每孔中參加50微升的顯色A液，然后每孔中參加50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘
8.停止，每孔參加50微升的停止液，留意，加完停止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù)，超越時刻讀數(shù)無效。在規(guī)則時刻內(nèi)讀數(shù)都是有用的。
至此，整個牛elisa試劑盒試驗完畢。需求額外提示的是：在做完整個試驗過儀器之前，儀器預(yù)熱半小時，這個計算好時刻，也能夠直接將儀器一向開著，直到整個試驗完畢。
牛elisa試劑盒樣本處理及要求：
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復凍融。
注：標本溶血會影響后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。