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細胞系與細胞株的建立解讀

閱讀:136          發(fā)布時間:2025-2-25

一、概念

1、細胞系(Cell Line):原代培養(yǎng)舞經首ci傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系(Lineage of Cells)所組成。

2、細胞株(Cell Strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細胞株(finitecell strain);如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細胞株(continuous cell strain)。對于人類腫瘤細胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

二、建立細胞系(或株)的要求

什么樣的體外培養(yǎng)群可被認可為己鑒定的細胞,視具體情況而定,無統(tǒng)一規(guī)定。對于用作原代培養(yǎng)的細胞只要供體均一,取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可,如用做長期培養(yǎng),特別是反復傳代的細胞,常需做如下說明:

1、組織來源:細胞供體所屬物種,來自人體或者動物;

個體性別、年齡;取材的器官或組織。

如系腫瘤組織,應說明臨床和病理診斷,以及病歷號等。

2、細胞生物學檢測:

了解細胞一般和特殊的生物學性狀,如細胞一般形態(tài),特異結構,細胞生長曲線和分裂指數(shù),倍增時間,接種率等。

如為腫瘤細胞,為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性,須做軟瓊脂培養(yǎng),異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實驗。

3、培養(yǎng)條件和方法;應說明細胞系(或株)適應的生存環(huán)境,即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及適宜PH值。

三、若干細胞建株的要點及基本過程

(一)腫瘤細胞培養(yǎng)技術要點

1、取材:材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織,取材時避免用壞死組織,要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位,瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),因故不能立即培養(yǎng)者,可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

2、成纖維細胞排除:在腫瘤組織中?;祀s有一些成纖維細胞,培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長,并常壓過癌細胞,導致癌細胞生長受阻以至消失,應仔細排除。

排除方法常有:機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

3、提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據(jù)實驗經驗,腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng),建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后,要經過對新環(huán)境的適應才能生長,因此不能局限于一般培養(yǎng)法,須采用一些特殊措施。如:用適宜底物,鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子,根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子,如胰島素、氫化可的松,雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

(二)人類淋巴母細胞建株方法

l、4ml肝素抗凝血于離心管中,加入2ml RPMI 1640。

2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。

3、1500rpm,15min,吸取白細胞層(第二層)于另一離心管中。

4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。

5、將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV(EB病毒)液,混勻。

6、水浴搖床,40次/分,37℃,3hr。

7、1500rpm,15min。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中(內含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl環(huán)胞霉素,輕輕混勻,37℃培養(yǎng)。

8、5天后觀察細胞轉化和生長情況,決定是否半量換液。一般半量換液l—2次,并維持環(huán)胞霉素的濃度。

9、待轉化細胞數(shù)量明顯上升,并出現(xiàn)細胞團塊后,可轉入25ml細胞培養(yǎng)瓶中,加1—2ml培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)10—15天,一般每隔3—4天觀察一次,決定是否換液,傳代。

10、細胞生長達一定數(shù)量后凍存,凍存前應進行核型分析和存檔。


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