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技術(shù)文章

細(xì)胞系與細(xì)胞株的建立解讀

閱讀:83          發(fā)布時(shí)間:2025-2-25

一、概念

1、細(xì)胞系(Cell Line):原代培養(yǎng)舞經(jīng)首ci傳代成功即成細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系(Lineage of Cells)所組成。

2、細(xì)胞株(Cell Strain):通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細(xì)胞株(finitecell strain);如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細(xì)胞株(continuous cell strain)。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

二、建立細(xì)胞系(或株)的要求

什么樣的體外培養(yǎng)群可被認(rèn)可為己鑒定的細(xì)胞,視具體情況而定,無(wú)統(tǒng)一規(guī)定。對(duì)于用作原代培養(yǎng)的細(xì)胞只要供體均一,取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可,如用做長(zhǎng)期培養(yǎng),特別是反復(fù)傳代的細(xì)胞,常需做如下說(shuō)明:

1、組織來(lái)源:細(xì)胞供體所屬物種,來(lái)自人體或者動(dòng)物;

個(gè)體性別、年齡;取材的器官或組織。

如系腫瘤組織,應(yīng)說(shuō)明臨床和病理診斷,以及病歷號(hào)等。

2、細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè):

了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀,如細(xì)胞一般形態(tài),特異結(jié)構(gòu),細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù),倍增時(shí)間,接種率等。

如為腫瘤細(xì)胞,為說(shuō)明來(lái)源于原腫瘤組織并保持惡性,須做軟瓊脂培養(yǎng),異體接種致瘤和對(duì)正常組織侵潤(rùn)力等實(shí)驗(yàn)。

3、培養(yǎng)條件和方法;應(yīng)說(shuō)明細(xì)胞系(或株)適應(yīng)的生存環(huán)境,即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及適宜PH值。

三、若干細(xì)胞建株的要點(diǎn)及基本過(guò)程

(一)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)

1、取材:材料主要來(lái)源于外科手術(shù)或活檢瘤組織,取材時(shí)避免用壞死組織,要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位,瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),因故不能立即培養(yǎng)者,可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

2、成纖維細(xì)胞排除:在腫瘤組織中?;祀s有一些成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時(shí)能與瘤細(xì)胞同時(shí)生長(zhǎng),并常壓過(guò)癌細(xì)胞,導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)受阻以至消失,應(yīng)仔細(xì)排除。

排除方法常有:機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

3、提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率

根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng),建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。一般當(dāng)腫瘤組成或細(xì)胞被原代培養(yǎng)后,要經(jīng)過(guò)對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng),因此不能局限于一般培養(yǎng)法,須采用一些特殊措施。如:用適宜底物,鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長(zhǎng)因子,根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子,如胰島素、氫化可的松,雌激素等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。

(二)人類淋巴母細(xì)胞建株方法

l、4ml肝素抗凝血于離心管中,加入2ml RPMI 1640。

2、混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min。

3、1500rpm,15min,吸取白細(xì)胞層(第二層)于另一離心管中。

4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次。

5、將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中,加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV(EB病毒)液,混勻。

6、水浴搖床,40次/分,37℃,3hr。

7、1500rpm,15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中(內(nèi)含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl環(huán)胞霉素,輕輕混勻,37℃培養(yǎng)。

8、5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況,決定是否半量換液。一般半量換液l—2次,并維持環(huán)胞霉素的濃度。

9、待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升,并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后,可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加1—2ml培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)10—15天,一般每隔3—4天觀察一次,決定是否換液,傳代。

10、細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存,凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。


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