人科研用RT-PCR試劑盒注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

產(chǎn)品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增，從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比，對PCR反應(yīng)抑制更小，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系，進而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應(yīng)，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強，可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。

產(chǎn)品名稱	人科研通用RT-PCR試劑盒
英文名稱	Human Coronavirus（HCoV
編號	BJP3157

通用原則：
1，先選擇好探針，然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。
2， 擴增子的長度應(yīng)不超過400bp，理想的能在100－150bp內(nèi)，擴增片斷約短，有效的擴增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng)，從而會導(dǎo)致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號。
4， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5， 將引物和探針互相進行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b），探針設(shè)計指導(dǎo)
1，在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細審查GC富含區(qū)。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應(yīng)效率，這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個bp。
7， 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
人科研通用RT-PCR試劑盒服務(wù)流程:
1.客戶認真寫好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款（30-50%)；
3.設(shè)計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄；
5.PCR預(yù)實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測；
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報告。
以下是公司*產(chǎn)品：

卡莫司汀標準品Percoll 細胞分離液（1.131）

卡莫司汀相關(guān)物質(zhì)A標準品Percoll 細胞分離液（1.131）

鹽酸卡替洛爾標準品Cytidine 胞苷(胞嘧啶核苷）

蔓荊子黃素標準品Cytidine 胞苷(胞嘧啶核苷）

(+)-兒茶酸標準品D-Glucuronic acid D-葡萄糖醛酸

鹽酸卡西標準品Thymine 胸腺嘧啶

貓爪草提取物標準品Thymine 胸腺嘧啶

頭孢克洛標準品L-Lysine L-賴氨酸鹽酸鹽

頭孢克洛△3-異構(gòu)體標準品L-Lysine L-賴氨酸鹽酸鹽

羥氨芐頭孢菌素標準品5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽 BCIP  Amresco二羥基酮標準品1,4-二醇二縮水甘油醚 50ml

糠酸二氯尼特標準品N-Acetyl-L-tyrosine N-酰-L-酪氨酸

鹽酸地爾硫卓標準品L-Arginine-L-pyroglutamate L-精氨酸-L-焦谷氨酸

地爾硫卓相關(guān)物質(zhì)A標準品p-Rosolic acid  玫紅酸

茶苯海明標準品N-Acetyl-L-methionine N-酰-L-蛋氨酸

鹽酸奎尼卡因標準品N-Acetyl-DL-Leucine N-酰-DL-亮氨酸

二基亞砜標準品Salicylaldehyde 水楊

地諾前列素氨三醇標準品O-(2,4-dinitrophenyl)hydroxylaMine 2,4-二硝基苯基羥胺

地諾前列酮標準品Calcium L-Aspartate L-天門冬氨酸鈣

二羥苯宗標準品Polycaprolactone 聚己內(nèi)酯 C600

原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。