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2-8℃ 避光

開(kāi)蓋后組份按要求條件保存。

6個(gè)月

分光光度計(jì)

血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液、組織裂解液

分光光度計(jì)

1.分光光度計(jì)
2.恒溫水浴鍋
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰盒

1.生理鹽水
2.純水
3.蛋白定量試劑盒

1.96孔板
2.吸頭

1.試劑B2干粉開(kāi)蓋使用前先敲入瓶底部，防止開(kāi)蓋時(shí)灑落導(dǎo)致?lián)p失。
2.血清/培養(yǎng)液等液體樣本直接檢測(cè)或用生理鹽水稀釋后檢測(cè)。
3.檢出限為10μmol/L。

1. 樣品準(zhǔn)備
組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：生理鹽水體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g 組織，加入1mL 生理鹽水）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
血清，培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

2. 試劑配制：
使用前，準(zhǔn)確吸取10ml試劑B1加入試劑B2干粉，充分溶解混勻，即成試劑B工作液，4℃避光保存。

3. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零。

4. 總巰基的測(cè)定
按下表在96孔板中加入試劑，對(duì)照孔每個(gè)樣品均做。
混勻，25℃靜置10min，測(cè)定412nm 吸光值。
ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。
【注】：
? 如果OD值太大，可以將樣品用試劑A稀釋后再檢測(cè)。

5. 計(jì)算
血清中總巰基含量（mmol/L）
=ΔA ÷0.8618×V 反總÷V 樣×103
=5800×ΔA

組織細(xì)胞中總巰基含量（mmol/g）
（1）按樣本重量計(jì)算
總巰基含量（μmol/g 鮮重）
=ΔA ÷0.8618×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）
=5.8×ΔA÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
總巰基含量（μmol/mg prot）
=ΔA ÷0.8618×V 反總÷（V 樣×Cpr）
=5.8×ΔA÷Cpr

【注】：
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；
V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣品質(zhì)量，g ；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L