Kinetex HPLC/UHPLC 色譜柱保養(yǎng)與使用提示

一般信息

Phenomenex 制造的每支 Kinetex 色譜柱都經(jīng)過單獨(dú)準(zhǔn)備和檢測(cè)。每支色譜柱都附帶一份質(zhì)量保證證書 (CQA)，證書中說(shuō)明了測(cè)試條件、工作溫度和色譜柱詳細(xì)信息。將色譜柱詳細(xì)信息（例如規(guī)范和性能測(cè)試結(jié)果）輸入您的信息管理系統(tǒng)，即可輕松地進(jìn)行跟蹤和參考。

檢驗(yàn)

收到色譜柱后，請(qǐng)驗(yàn)證您手上的色譜柱是您所訂購(gòu)的色譜柱（即規(guī)格、粒徑和填料均是您選擇的值）。此外，也要檢查色譜柱是否在運(yùn)輸期間產(chǎn)生損傷。檢查后應(yīng)立即測(cè)試色譜柱以驗(yàn)證性能，并將測(cè)試結(jié)果記錄到您的色譜柱信息管理系統(tǒng)中。

色譜柱特性

? 出廠溶劑的有機(jī)溶劑與水溶性溶劑比可能會(huì)稍有不同，具體取決于色譜柱規(guī)格。

* 梯度條件下的 pH 范圍。等度條件下的 pH 范圍為 1.5-10。

典型流速、背壓、溫度：

下面是常見規(guī)格的 Kinetex HPLC 和 UHPLC 色譜柱的一些典型值。這些數(shù)字不是絕對(duì)值，并且在不同的液相色譜系統(tǒng)、運(yùn)行參數(shù)和樣品分析物/基質(zhì)下可能不同。以下數(shù)值經(jīng)由使用乙腈和水組成的溶劑系統(tǒng)創(chuàng)建。

典型流速（不受粒徑影響）：

i. 4.6 mm 內(nèi)徑為 1.0 mL/min

ii. 2.1 mm 內(nèi)徑為 0.2-0.6 mL/min

iii. 1.0 mm 內(nèi)徑為 0.02-0.1 mL/min

背壓上限：

iv. 對(duì)于 1.3 μm，大于 15,000 psi (1,034 bar) 可能會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

v. 對(duì)于 1.7 μm，大于 15,000 psi (1,034 bar) 可能會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

vi. 對(duì)于 2.1 mm 內(nèi)徑，大于 15,000 psi (1,034 bar) 可能會(huì)縮短色譜柱使用

壽命。

vii. 對(duì)于 3.0 和 4.6 mm 內(nèi)徑，大于 8700 psi (600 bar) 可能會(huì)縮短色譜柱使

用壽命。

溫度上限：

viii. Kinetex 液相色譜柱的建議溫度上限不超過 60°C，不過，溫度限值取決于

您的運(yùn)行參數(shù)。在 60°C 下以大于 8 的 pH 運(yùn)行將縮短色譜柱使用壽命。

ix. 在溫度限值下連續(xù)使用 Kinetex 色譜柱可能會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

流動(dòng)相兼容性

使用任何 HPLC/UHPLC 色譜柱時(shí)，務(wù)必使用 HPLC 級(jí)溶劑和材料，同時(shí)也要避免不混溶的溶劑/緩沖液組合。此外，強(qiáng)烈建議過濾溶劑以移除所選流動(dòng)相中的微量物質(zhì)。以下 Kinetex 相可以在 100% 水溶性條件下保持穩(wěn)定：Polar C18、EVO  C18、Biphenyl 和 F5。對(duì)于所有 Kinetex 色譜柱，請(qǐng)確保流動(dòng)相 pH 不超過各種固定相的限值。請(qǐng)參見色譜柱特性部分中的圖表，了解各種 Kinetex 固定相的 pH 限值。

色譜柱安裝

您的液相色譜系統(tǒng)的初始設(shè)置對(duì)確保色譜柱性能至關(guān)重要：確保您的液相色譜系統(tǒng)滿足以下條件：

1. 密封、管線和進(jìn)樣器清潔

2. 已預(yù)充管線（沒有干燥的管線或氣泡）

3. 基線穩(wěn)定

4. 壓強(qiáng)一致

使用 HPLC 級(jí)、與色譜柱的出廠溶劑混溶的流動(dòng)相沖洗液相色譜系統(tǒng)泵和管線。

流動(dòng)相起始條件檢查清單：

1. 使用前，確保 HPLC 級(jí)流動(dòng)相已混合均勻、過濾和脫氣。

2. 確保色譜柱出廠溶劑、液相色譜系統(tǒng)內(nèi)的剩余溶劑和流動(dòng)相溶劑混溶。

將流速設(shè)置為 0.1 mL/min（適用于 2.1-4.6 mm 內(nèi)徑），安裝色譜柱，確保箭頭方向與流動(dòng)方向一致。將流速升高至 0.2 mL/min（2.1mm 內(nèi)徑）或1.0 mL/min（4.6 mm 內(nèi)徑），保持 5-10 分鐘。使用小燒杯收集溶劑。

停止流量并擦洗色譜柱的出樣口端以移除任何顆粒，然后再連接到檢測(cè)器。

將接頭/管線安裝到出樣口端，并以較低的流速（約 0.2 mL/min）至少通過10 倍于色譜柱容積的溶劑，同時(shí)監(jiān)測(cè)背壓。

1. 壓強(qiáng)穩(wěn)定說(shuō)明流速一致，壓強(qiáng)波動(dòng)則說(shuō)明系統(tǒng)中存在氣體。

2. 壓強(qiáng)大范圍波動(dòng)可能會(huì)沖擊和損壞色譜柱，因此，監(jiān)測(cè)壓強(qiáng)至關(guān)重要。

監(jiān)測(cè)壓強(qiáng)和檢測(cè)器信號(hào)，在兩者均穩(wěn)定后，色譜柱可以投入使用。

測(cè)試色譜柱性能

測(cè)試色譜柱性能時(shí)，請(qǐng)使用制造商批準(zhǔn)的測(cè)試混標(biāo)。

色譜柱清洗

反相：

• 使用與系統(tǒng)上一次所用溶劑系統(tǒng)最為接近的梯度清洗：

例如，如果上一次進(jìn)樣使用的是緩沖液/乙腈 (75:25)，則最好以 95:5 水/乙腈開始，然后根據(jù)需要逐步提高有機(jī)溶劑的含量（即 75:25 水/乙腈à50:50 水/乙腈à5:95 水/乙腈）。

• 對(duì)于疏水性或油性物質(zhì)，請(qǐng)?jiān)谑褂靡译鏇_洗色譜柱后嘗試使用異丙醇(IPA) 沖洗。使用 IPA 時(shí)，確保使用低流速，以免較大的溶劑粘度引起較高的背壓。

• 對(duì)于疏水性強(qiáng)的物質(zhì)，請(qǐng)使用四氫呋喃 (THF)。

HILIC：

• 要移除緩沖液，請(qǐng)至少使用 10 倍于色譜柱容積的 95:5 水/乙腈沖洗。使用 95:5 的 100 mM 乙酸銨 (pH 5.8)/乙腈重復(fù)沖洗。然后，使用 95:5 的水/乙腈沖洗色譜柱，進(jìn)行最后的清洗。

提示：

• 清洗時(shí)，將流速設(shè)置為低于方法流速，尤其是在嘗試使用甲醇或 IPA 清洗時(shí)。

• 長(zhǎng)時(shí)間沖洗一般比多次沖洗的效果好。

• 在系統(tǒng)使用 PEEK 管線的情況下，不建議使用大量的 THF。如果線為金屬材質(zhì)，則可以使用 THF。

• 可以反向沖洗色譜柱（沿著與色譜柱標(biāo)簽上箭頭指示相反的方向），但請(qǐng)使用低流速。下面是不同色譜柱內(nèi)徑的建議反向沖洗流速：

0.1 mL/min（2.1 mm 內(nèi)徑）

0.3 mL/min（3.0 mm 內(nèi)徑）

0.5 mL/min（4.6 mm 內(nèi)徑）

色譜柱再生

反相

• 使用與上面清洗步驟相同的沖洗梯度以低流速?zèng)_洗過夜。

• 可以進(jìn)行反向沖洗。

正相

• 要移除水，請(qǐng)使用以下溶液沖洗：

1. 30 mL 2.5% 的 2,2-二甲氧基丙烷和含 2.5% 冰乙酸的己烷

2. 然后，使用上面的清洗方法以低流速過夜沖洗色譜柱。

色譜柱儲(chǔ)存

儲(chǔ)存前，務(wù)必確保您的色譜柱清潔。包括移除緩沖液、鹽、樣品和離子配對(duì)劑。建議的儲(chǔ)存條件為：

• 反相：可以使用乙腈/水（體積比為 65:35）和甲醇替代乙腈。

• 正相：100% 己烷或 IPA

• HILIC：乙腈/水（體積比為 80:20）

• 請(qǐng)僅使用 HPLC 級(jí)或更高級(jí)別的溶劑儲(chǔ)存。

延長(zhǎng)色譜柱使用壽命的提示

• 利用固相萃?。⊿trata®-X SPE 產(chǎn)品）等樣品制備技術(shù)或配件（Phenex™ 針頭式過濾器），以便盡可能減少進(jìn)入您的系統(tǒng)和色譜柱上的污染物。

• 使用合適的保護(hù)柱、保護(hù)柱系統(tǒng) (SecurityGuard™) 在微粒阻塞您的色譜柱之前將其移除。

• 不要讓色譜柱過載。進(jìn)樣合適的樣品濃度和體積。

• 在色譜柱的適當(dāng)分離模式下工作。請(qǐng)參見色譜柱特性表，了解每種固定相適合的典型模式。

• 將您的色譜柱儲(chǔ)存在合適的溶劑中。

• 以較低流速?gòu)囊环N混溶溶劑緩慢富集到另一種，正確執(zhí)行溶劑切換：2.1 mm 內(nèi)徑為 0.1 mL/min，4.6 mm 內(nèi)徑為 0.5 mL/min。

色譜柱保修

Phenomenex 保證其 HPLC 色譜柱符合聲明的性能和質(zhì)量水平，并且不存在材料和工藝缺陷。如果您出于任何原因而不滿意，請(qǐng)致電您的 Phenomenex 技術(shù)代表。我們將竭盡全力解決您的問題，并讓您滿意。如果需要退回色譜柱，必須先

從 Phenomenex 獲得退回授權(quán)號(hào)。

免責(zé)聲明

分析之前，應(yīng)使用制造商建議的測(cè)試混標(biāo)測(cè)試新色譜柱，并使用相同或合適的測(cè)試混標(biāo)測(cè)試之前用過的色譜柱。更換溶劑時(shí)請(qǐng)記得重新平衡系統(tǒng)。請(qǐng)勿從一種溶劑切換到另一種不混溶的溶劑，并且也不應(yīng)使用與兩者都不混溶的中間溶劑。否

則將損壞色譜柱。如果緩沖液/鹽在第二種溶劑中不溶解，請(qǐng)勿在緩沖液/鹽溶液之間來(lái)回切換。否則也會(huì)損壞色譜柱。切勿嘗試移除色譜柱端接頭。這將導(dǎo)致保修無(wú)效。

色譜柱沖擊

小心處理色譜柱。請(qǐng)勿掉落或者造成物理沖擊。請(qǐng)勿以高流速開始泵送，而應(yīng)在幾分鐘內(nèi)緩慢增大流速。設(shè)置您的泵壓強(qiáng)限值，在發(fā)生阻塞時(shí)為色譜柱提供保護(hù)。阻塞將產(chǎn)生空隙，這會(huì)降低色譜柱的性能。