水溶Cy5 NHS,146368-14-1,鏈接多肽抗體熒光染料

水溶Cyanine 5琥珀酰亞胺酯（succinimidyl ester（SE）），類似于Cy5® NHS ester，不需要有機(jī)溶劑即在水相中即可對(duì)各種帶氨基分子進(jìn)行標(biāo)記。因此該產(chǎn)品尤其適用于對(duì)那些在有機(jī)溶劑中易變性的蛋白和低溶解度蛋白的標(biāo)記。

Sulfo-Cyanine 5是Cy5®的衍生物，與很多儀器如讀板機(jī)（plate readers），顯微鏡和成像設(shè)備等相兼容。是受歡迎的熒光染料之一。

 該染料是高度親水的、水溶的。非磺化的衍生物：Cyanine 5 NHS ester。

可以在所有的應(yīng)用中替代Cy5®，Alexa Fluor 647和DyLight 649。

一般特性

外觀:	dark blue powder
分子量:	761.84
分子式:	C36H40N3NaO10S2
溶解性:	very good in water, good in DMF and DMSO
質(zhì)量控制:	NMR 1H (95%) and 13C, TLC, functional testing
儲(chǔ)存條件:	Storage: 24 months after receival at -20°C in the dark. Transportation: at room temperature for up to 3 weeks. Avoid prolonged exposure to light. Desiccate.

 

光譜特性

大激發(fā)波長(zhǎng), nm:	646
在大激發(fā)波長(zhǎng)下的消光系數(shù), Lmol-1cm-1:	271000
大發(fā)生波長(zhǎng), nm:	662
熒光量子產(chǎn)率:	0.2
CF260:	0.13
CF280:	0.13

 

供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司

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Cyanine5 NHS ester和標(biāo)記 (D-ser2)-leucineenkephalin的連接實(shí)驗(yàn)方法和步驟

【準(zhǔn)備材料】：

Cy5 NHS ester purchased from xi an ruixibio

(D-ser2)-leucineenkephalin purchased fromsigma

【實(shí)驗(yàn)步驟】：

1.      Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalinacetate(YSGFLT, 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)

2.      然后加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物過夜。

3.      用HPLC 純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(對(duì)不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動(dòng)相)

4.      收集適當(dāng)?shù)纳珟Х?，?biāo)記多肽的保留時(shí)間比未標(biāo)記的多肽長(zhǎng)。

5.      產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存;必要時(shí)可用質(zhì)譜表征。

6.      CyDye標(biāo)記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標(biāo)記的IgG在4 ℃可避光保存2月;更長(zhǎng)期的保存需加入等體積的甘油-20 ℃避光保存.

F/P計(jì)算：

Cy5 在650 nm 的摩爾吸光系數(shù)為250 000 M-1 cm-1 ，所用蛋白在280 nm處的摩爾吸光系數(shù)為 170

000 M-1 cm-1;Cy5在280nm處的吸收是650nm處的5%。按以下公式計(jì)算F/P值。

[Cy5 dye] = (A650)/250 000

[peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170 000

F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/{A280 - (0.05×A650)}

N-羥基琥珀酰亞胺脂Dye NHS esters

Pyrenebutyric acid NHS ester

ROX NHS ester, pure 6- isomer

BDP FL NHS ester

FAM NHS ester

Cyanine3 NHS ester

Cyanine3.5 NHS ester

Cyanine5 NHS ester

Cyanine5.5 NHS ester

Cyanine7 NHS ester

Cyanine7.5 NHS ester

Sulfo-Cyanine3 NHS ester

Sulfo-Cyanine5 NHS ester

sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester

Sulfo-Cyanine7 NHS ester