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超聲波破碎細(xì)胞的常見問題有哪些
大腸桿菌表達外源蛋白，在超聲破碎的時候，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮，然后超聲的效果較好，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對其他的一些細(xì)菌同樣起作用，比如鏈霉菌。
細(xì)菌沉淀直接加樣品1buffer，再加5ul的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min（下次適當(dāng)補點醋酸即可）,將染色液換成大量的水（自來水即可）在微波爐煮10min就可以。
在表達重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會就產(chǎn)生大量泡沫，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，zui后都是破碎不*，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。
1.會產(chǎn)生氣泡是因為你的探頭位置沒放好。探頭一定要接近底部，約1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根據(jù)儀器不同會有所不同，但你可以觀察液面，有波動但不要太劇烈就好。
2.破3S停10S，破個二三十次看看。
3.變幅桿位置擺放也要注意，聽聲音如果不對的話就要及時調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。在破碎時試著加大體積,強度不要超過60%.
4.嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說，你的方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，停頓時間稍長一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。
鏈霉菌（放線菌）超聲破碎的，用的方法條件是什么？
前處理一般就是配置成一定濃度的菌懸液。
使用超聲破碎時采用的具體條件是：
（1）取細(xì)菌的24h培養(yǎng)液于5000r／min下離心5min收集菌體．
（2）用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液洗滌3次，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液．置于40mL大塑料試管內(nèi)．
（3）將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎（功率200W，1／2”探頭，破碎30s，間歇30S）．
（4）破碎液于12000r／min下高速冷凍離心30min，收集細(xì)胞碎片和上清夜．