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HTRF Human Phospho-AKT1/2/3 (Ser473) Detection Kit
| 參考價: | 面議 |
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- revvity 品牌
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訪問次數(shù)：36更新時間：2024-10-30 16:56:42
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
| 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| 64AKSPEH | HTRF AKT P-S473 KIT | 10K PTS |
| 64AKSPEY | HTRF AKT P-S473 KIT | 50K PTS |
磷酸化 AKT（Ser473）試劑盒旨在穩(wěn)定且高效地監(jiān)測所有亞型的 AKT 在 Ser473 位點(diǎn)的磷酸化，作為 PI3K 通路激活的讀出指標(biāo)。AKT 也被稱為蛋白激酶 B（PKB），是一種癌基因，控制細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞遷移和葡萄糖代謝。
產(chǎn)品特點(diǎn)
工作原理：
磷酸化 AKT（Ser473）檢測原理：
磷酸化 AKT（Ser473）檢測用于測量在 Ser473 位點(diǎn)磷酸化的 AKT。與蛋白質(zhì)印跡法不同，該檢測基于微孔板，不需要凝膠、電泳或轉(zhuǎn)膜。磷酸化 AKT（Ser473）檢測使用兩種標(biāo)記抗體，一種帶有供體熒光團(tuán)，另一種帶有受體。第一種抗體因其對蛋白質(zhì)上磷酸化基序的特異性結(jié)合而被選擇，第二種抗體因其能夠識別不依賴于其磷酸化狀態(tài)的蛋白質(zhì)的能力而被選擇。蛋白質(zhì)磷酸化使得涉及兩種標(biāo)記抗體的免疫復(fù)合物形成，這使供體熒光團(tuán)與受體緊密接近，從而產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）信號。其強(qiáng)度與樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度直接成正比，并在無需洗滌的檢測形式下提供了一種評估蛋白質(zhì)磷酸化狀態(tài)的方法。
磷酸化 AKT（Ser473）雙板檢測方案：
雙板方案涉及在 96 孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后進(jìn)行裂解，接著將裂解物轉(zhuǎn)移到 384 孔低體積檢測板中，之后加入磷酸化 AKT（Ser473）檢測 HTRF 檢測試劑。該方案能夠監(jiān)測細(xì)胞的活力和融合度。
磷酸化 AKT（Ser473）單板檢測方案：
使用 HTRF 試劑檢測磷酸化 AKT（Ser473）可以在一個用于培養(yǎng)、刺激和裂解的單板上進(jìn)行。無需洗滌步驟。這個為高通量篩選設(shè)計的方案能夠?qū)崿F(xiàn)微型化，同時保持強(qiáng)大的 HTRF 質(zhì)量。
檢測驗證：
在 HEK 293 細(xì)胞上進(jìn)行的磷酸化 AKT（Ser473）檢測 IGF 劑量反應(yīng)：
在使用三種細(xì)胞密度（每孔 12,500 - 25,000 - 50,000 個細(xì)胞）接種的 HEK 細(xì)胞上獲得的結(jié)果。在饑餓 24 小時后，用各種濃度的 IGF 刺激細(xì)胞 10 分鐘。使用雙板檢測方案在 3.5 小時后測量磷酸化 AKT。
用總 AKT 來控制 AKT（Ser473）的磷酸化狀態(tài)。
使用磷酸化 AKT（Ser473）和總 AKT 檢測的雙板檢測方案，用 IGF-1 激活 HEK293 細(xì)胞（每孔 100,000 個細(xì)胞）10 分鐘。正如預(yù)期的那樣，獲得的結(jié)果顯示在 IGF-1 刺激下 AKT 磷酸化呈劑量反應(yīng)性增加，而 AKT 的表達(dá)水平保持恒定。
簡化的通路：
AKT 簡化通路：
AKT（或蛋白激酶 B）在控制存活和凋亡中起著關(guān)鍵作用。這種絲 / 蘇蛋白激酶由胰島素和各種生長和存活因子調(diào)節(jié)，在涉及 PI3 激酶的渥曼敏感通路中起作用。當(dāng) AKT 的 Pleckstrin 同源（PH）結(jié)構(gòu)域與磷酸肌醇結(jié)合時，AKT 可以被兩種不同的激酶磷酸化，PDK1 在蘇 308 位點(diǎn)和 mTORC2（哺乳動物雷帕霉素靶蛋白）在絲 473 位點(diǎn)，從而開啟 AKT 的激活。
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